Wild Taq DNS polimerāze
Taq DNS polimerāze ir termostabila DNS polimerāze no Thermus aquaticus YT-1, kurai piemīt 5′→3′ polimerāzes aktivitāte un 5′ atloka endonukleāzes aktivitāte.
Sastāvdaļas
| Komponents | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq buferis | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNS polimerāze (5 U/μl) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Uzglabāšanas stāvoklis
Transportēšana zem 0°C un jāuzglabā -25°C~-15°C.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā fermenta daudzums, kas 30 minūtēs 75°C temperatūrā iekļauj 15 nmol dNTP skābē nešķīstošā materiālā.
Kvalitātes kontrole
1.Olbaltumvielu tīrības tests (SDS-PAGE):Taq DNS polimerāzes tīrība tika noteikta ar SDS-PAGE analīzi ≥95%.
2.Endonuclease aktivitāte:Vismaz 5 U Taq DNS polimerāzes ar 1 μg λDNS 16 stundas 37 ℃ temperatūrā nenosakāmu degradāciju, kā noteikts.
3.Eksonukleāzes aktivitāte:Vismaz 5 U Taq DNS polimerāzes ar 1 μg λ-Hind Ⅲ sagremotas DNS 16 stundas pie 37 ℃ neizraisa nosakāmu degradāciju, kā noteikts.
4.Nikase darbība:Vismaz 5 U Taq DNS polimerāzes ar 1 μg pBR322 DNS 16 stundas 37 °C temperatūrā nenosakāmu degradāciju, kā noteikts.
5.RNāzes aktivitāte:Kā noteikts, vismaz 5 U Taq DNS polimerāzes ar 1,6 μg MS2 RNS 16 stundas 37°C temperatūrā nenosaka noārdīšanos.
6.E. coliDNS:5 U Taq DNS polimerāzes pārbauda, lai noteiktu E. coli genoma DNS klātbūtni, izmantojot TaqMan qPCR ar E. coli 16S rRNS lokusam specifiskiem praimeriem.E. coli genoma DNS piesārņojums ir ≤1 kopija.
7.PCR amplifikācija (5,0 kb lambda DNS)- 50 µL reakcija, kas satur 5 ng Lambda DNS ar 5 vienībām Taq DNS polimerāzes 25 PCR amplifikācijas cikliem, rada paredzamo 5,0 kb produktu.
Reakcijas iestatīšana
| Sastāvdaļas | Skaļums |
| Veidnes DNSa | neobligāti |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM reversais gruntējums | 1 μL |
| dNTP maisījums (katrs 10 mM) | 1 μL |
| 10 × Taq buferis | 5 μL |
| Taq DNS polimerāzeb | 0,25 μl |
| Ūdens bez kodola | Līdz 50 μL |
Piezīmes:
1) Dažādu šablonu optimālā reakcijas koncentrācija ir atšķirīga.Nākamajā tabulā parādīts ieteicamais 50 µL reakcijas sistēmas veidnes lietojums.
| DNS | Summa |
| Genomisks | 1 ng-1 μg |
| Plazmīda vai vīrusu | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNS polimerāzes optimālā koncentrācija specializētos lietojumos var svārstīties no 0,25 µL ~ 1 µL.
ReakcijaProgramma
| Solis | Temperatūra(°C) | Laiks | Cikli |
| Sākotnējā denaturācijaa | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturācija | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cikli |
| Atkausēšanab | 60 ℃ | 15 s | |
| Pagarinājums | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Pēdējais pagarinājums | 72 ℃ | 5 min | - |
Piezīmes:
1) Sākotnējie denaturācijas nosacījumi ir piemēroti lielākajai daļai amplifikācijas reakciju, un to var mainīt atkarībā no veidnes struktūras sarežģītības.Ja šablona struktūra ir sarežģīta, pirmsdenaturācijas laiku var pagarināt līdz 5–10 minūtēm, lai uzlabotu sākotnējo denaturācijas efektu.
2) Atlaidināšanas temperatūra ir jāpielāgo atbilstoši gruntskrāsas Tm vērtībai, kas parasti ir iestatīta uz 3–5 ℃ zemāka nekā gruntskrāsas Tm vērtība;Sarežģītām veidnēm ir jāpielāgo atkausēšanas temperatūra un jāpagarina pagarinājuma laiks, lai panāktu efektīvu pastiprināšanu.
