Rnase A
Ribonukleāze A (RNaseA) ir vienpavedienu polipeptīds, kas satur 4 disulfīda saites ar molekulmasu aptuveni 13,7 kDa.RNāze A ir endoribonukleāze, kas specifiski noārda vienpavedienu RNS pie C un U atlikumiem.Konkrēti, šķelšanās atpazīst fosfodiestera saiti, ko veido nukleotīda 5'-riboze un fosfātu grupa blakus esošā pirimidīna nukleotīda 3'-ribozē, tādējādi 2, 3'-cikliskie fosfāti tiek hidrolizēti līdz atbilstošajiem ′nukleozīdu fosfāti (piemēram, pG-pG-pC-pA-pG šķeļ RNāze A, lai radītu pG-pG-pCp un A-PG).RNāze A ir visaktīvākā vienpavedienu RNS šķelšanā.Ieteicamā darba koncentrācija ir 1-100μG/mL, saderīga ar dažādām reakciju sistēmām.Zemu sāls koncentrāciju (0-100 mM NaCl) var izmantot, lai sagrieztu vienpavedienu RNS, divpavedienu RNS un RNS ķēdes, kas veidojas RNS-DNS hibridizācijas rezultātā.Tomēr pie augstas sāls koncentrācijas (≥0,3 M) RNāze A specifiski šķeļ vienpavedienu RNS.
RNāzi A visbiežāk izmanto, lai noņemtu RNS plazmīdas DNS vai genoma DNS sagatavošanas laikā. Neatkarīgi no tā, vai DNāze sagatavošanas procesā ir aktīva, var viegli ietekmēt reakciju.DNāzes aktivitātes inaktivēšanai var izmantot tradicionālo vārīšanas metodi ūdens vannā.Šis produkts nesatur DNāzi un proteāzi, un pirms lietošanas tam nav nepieciešama termiskā apstrāde.Turklāt šo produktu var izmantot arī molekulārās bioloģijas eksperimentos, piemēram, RNāzes aizsardzības analīzē un RNS sekvences analīzē.
Uzglabāšanas apstākļi
Produktu var uzglabāt -25～-15 ℃, derīguma termiņš 2 gadi.
Instrukcijas
Šī ir viena no izplatītākajām metodēm RNāzes A uzglabāšanas šķīduma pagatavošanai.To var pagatavot arī līdzcitas metodes saskaņā ar tradicionālajām metodēm laboratorijā vai uzziņu literatūrā (piemēram,tieši izšķīdinot 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 vai Tris-NaCl šķīdumā)
1. Izmantojiet 10 mM nātrija acetātu (pH 5,2), lai sagatavotu 10 mg/ml RNāzes A uzglabāšanas šķīdumu.
2. Karsēšana pie 100 ℃ 15 min
3. Atdzesējiet līdz istabas temperatūrai, pievienojiet 1/10 tilpuma 1 M Tris-HCl (pH 7,4), noregulējiet tā pH uz 7,4 (parPiemēram, pievienojiet 500 ml 10 g/ml RNāzes uzglabāšanas šķīduma 1M Tris-HCL, PH7,4)
4. Iepakots -20 ℃ temperatūrā saldētai uzglabāšanai, kas var būt stabils līdz 2 gadiem.
[Piezīmes]: vārot RNāzesA šķīdumu neitrālos apstākļos, veidosies RNāzes nogulsnes;Vāra to pie zemāka pH, un, ja ir nokrišņi, tos var novērot, ko var izraisīt olbaltumvielu piemaisījumu klātbūtne.Ja pēc vārīšanas tiek konstatētas nogulsnes, piemaisījumus var noņemt ar ātrgaitas centrifugēšanu (13000 apgr./min) un pēc tam iepakot uzglabāšanai sasaldēšanai.
Informācija par produktu
| Sinonīmi | Ribonukleāze I;Aizkuņģa dziedzera ribonukleāze;Ribonukleāze 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolāze;Rnase A;Endoribonulceāze I |
| CAS Nr. | 9001-99-4 |
| Izskats | Balts liofilizēts pulveris |
| Molekulārais svars | ~ 13,7 kDa (aminoskābju secība) |
| Ph vērtība | 7,6 (aktivitātes diapazons 6–10) |
| Piemērota temperatūra | 60 ℃ (aktivitātes diapazons 15-70 ℃) |
| Aktivizējošais līdzeklis | Na2+.K+ |
| Inhibitors | Rnāzes inhibitors |
| Inaktivācijas metode | Karsējot nevar inaktivēt, ieteicams izmantot centrifūgas kolonnu |
| Izcelsme | Liellops |
| Šķīdība | Šķīst ūdenī (10mg/ml) |
| Zaudējums uz sausa | ≤5,0% |
| Fermentu aktivitāte | ≥60 Kunica vienības/mg |
| Izoelektriskais punkts | 9.6 |
Piezīmes
Jūsu drošībai un veselībai, lūdzu, valkājiet laboratorijas mēteļus un vienreizējās lietošanas cimdus.
