Parauga atbrīvošanas reaģents
Parauga atbrīvošanas reaģents ir paredzēts molekulārajiem POCT diagnostikas scenārijiem.Abām sistēmām tiešās amplifikācijas LAMP un tiešās amplifikācijas PCR nav nepieciešama nukleīnskābju ekstrakcija.Parauga neapstrādāto lizātu var tieši pastiprināt, mērķa gēnu var precīzi noteikt, parauga noteikšanas laiku var vēl vairāk saīsināt, kas lieliski atbilst molekulārās POCT pielietošanas prasībām.Tas ir piemērots deguna tamponiem, rīkles tamponiem un citiem paraugu veidiem.Apstrādātos paraugus var tieši izmantot reālā laika fluorescences kvantitatīvai PCR vai LAMP noteikšanai, un tos pašus rezultātus kā parastās ekstrakcijas metodes var sasniegt bez sarežģītām nukleīnskābju ekstrakcijas darbībām.
Uzglabāšanas apstākļi
Transportēt un uzglabāt istabas temperatūrā.
Kvalitātes kontrole
Funkcionālā noteikšana – kvantitatīvā qPCR: tika pastiprināta 800 μl parauga atbrīvošanas reaģenta sistēma
ar 1000 kopijām Jaunais pseidovīruss, viens deguna uztriepes paraugs, kas rada līdzīgas amplifikācijas līknes unΔCt vērtības ± 0,5 Ct robežās.
Eksperimentālā procedūrares
1. Paņemiet 800 μl parauga atbrīvošanas reaģenta un izklājiet līzes šķīdumu 1,5 ml paraugu ņemšanas mēģenē.
2. Paņemiet deguna vai rīkles tamponu ar tamponu;Deguna tamponu paraugu ņemšanas procedūra: paņemiet sterilo tamponu un ievietojiet to nāsīs, lēnām virziet apmēram 1,5 cm dziļumā, viegli pagrieziet 4 reizes pret deguna gļotādu ilgāk par 15 sekundēm. , pēc tam atkārtojiet to pašu darbību otrā deguna dobumā ar to pašu tamponu.Rīkles uztriepes paraugu ņemšanas procedūra: paņemiet sterilo tamponu un uzmanīgi, ātri noslaukiet rīkles mandeles un rīkles aizmugurējo sieniņu 3 reizes.
3.Nekavējoties ievietojiet tamponu paraugu ņemšanas mēģenē.Tamponu galviņa jāpagriež un jāsamaisa uzglabāšanas šķīdumā vismaz 30 sekundes, lai nodrošinātu, ka paraugs pilnībā eluējas parauga ņemšanas mēģenē.
4. Inkubēšana istabas temperatūrā (20 ~ 25 ℃) 1 minūti, līzes buferšķīduma sagatavošana ir pabeigta.
5. Gan 25μl sistēmas RT-PCR, gan RT-LAMP bija saderīgi ar 10μl veidnes pievienošanu noteikšanas eksperimentiem.
Piezīmes
1. Minimālo parauga tiešā lizāta daudzumu, kas atbilst vienam tamponam, var noregulēt uz 400μl, ko var pielāgot atbilstoši testēšanas vajadzībām.
2. Kad paraugs ir apstrādāts ar parauga izdalīšanas reaģentu, ir ieteicams pēc iespējas ātrāk veikt nākamo testa fāzi, vēlams, lai gaidīšanas laiks būtu mazāks par 1 stundu.
3. Parauga lizāta pH ir skābs, un noteikšanas sistēmai ir jābūt noteiktam buferšķīdumam.Tas ir piemērots lielākajai daļai PCR, RT-PCR un LAMP fluorescences noteikšanai ar pH buferšķīdumu, bet nav piemērots LAMP kolorimetriskai noteikšanai bez bufera.
