Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kaķa Nr.: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG ir specializēts reaģents, kas paredzēts reāllaika PCR kvalitatīvām un kvantitatīvajām reakcijām, izmantojot uz zondi balstītu noteikšanu, kas īpaši izstrādāts liofilizācijas procesiem.Tas satur jaunu karstās palaišanas enzīmu Hotstart Taq plus (DG), kura Taq enzīma aktivitāte ir noslēgta istabas temperatūrā, efektīvi kavējot nespecifisku amplifikāciju, ko izraisa primera nespecifiskā atkausēšana vai praimera dimēra veidošanās zemas temperatūras apstākļos, tādējādi uzlabojot. amplifikācijas reakcijas specifika.Šis reaģents izmanto optimizētu qPCR specifisko buferi un UNG/dUTP pretpiesārņojuma sistēmu, lai panāktu ātru karsto palaišanu, ievērojami uzlabojot qPCR reakciju efektivitāti un jutīgumu.Tas var iegūt labas standarta līknes plašā kvantitatīvās noteikšanas apgabalos un precīzi veikt kvantitatīvo noteikšanu, efektīvi novēršot viltus pozitīvu amplifikāciju, ko izraisa atlikušie PCR produkti vai aerosola piesārņojums.Šis reaģents ir saderīgs ar lielāko daļu fluorescējošu kvantitatīvo PCR instrumentu no tādiem ražotājiem kā Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad un Roche utt., un tam ir laba stabilitāte liofilizētā veidā.
Reaģenta sastāvs
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bezmaksas) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lioprotektors (pēc izvēles)
Uzglabāšanas apstākļi
Ilgstoša uzglabāšana -20 ℃;var uzglabāt 4℃ temperatūrā līdz 3 mēnešiem.Pirms lietošanas labi samaisa unizvairieties no atkārtotas sasaldēšanas un atkausēšanas.
Riteņbraukšanas protokols
| Procedūra | Temp. | Laiks | Cikls |
| Gremošana | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polimerāzes aktivizēšana | 95℃ | 1–5 min | 1 |
| Denaturācija | 95℃ | 10–20 s | 40-50 |
| Atkausēšana un pagarināšana | 56 ~ 64 ℃ | 20–60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Systublāju sagatavošana
|
Sastāvs |
25µL tilpums |
50µL tilpums |
Galīgā koncentrācija |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+bezmaksas) (DG) | 5µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotektors1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25 × Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Veidnes DNS3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Līdz 25 µL | Līdz 50 µl | —— |
1. Primeru galīgā koncentrācija 0,2 μM parasti dod labus rezultātus;ja reakcija ir slikta, pēc vajadzības noregulējiet primera koncentrāciju diapazonā no 0,2 līdz 1 μM.Zondes koncentrācija parasti tiek optimizēta diapazonā no 0, 1 līdz 0, 3 μM, izmantojot gradienta eksperimentus, lai atrastu optimālas kombinācijas.
2. Dažāda veida veidnēs ietverto mērķa gēnu kopiju skaits atšķiras;ja nepieciešams, var veikt gradienta atšķaidīšanu, lai noteiktu optimālo veidnes pievienošanas daudzumu.
3. Šo sistēmu var liofilizēt;ja klienti izmanto šo sistēmu bez saldēšanas-žāvēšanas prasībām, var selektīvi pievienot 4 × lioprotektoru; ja ir nepieciešami liofilizēti produkti, šķidro reaģentu stadijas produkta veiktspējas apstiprināšanas laikā tai jāpievieno 4 × lioprotektors, lai nodrošinātu konsekvenci ar liofilizētās sistēmas komponentiem. un efekti.
Kad sistēma tiek izmantotad žāvēšanai liofilizē sagatavojiet sistēma as sekojošs:
| Sastāvs | 25µL Reakcijas sistēma |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bezmaksas) (DG) | 5µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl |
| 4 × lioprotektors | 6,25 µL |
| 25 × Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Līdz 18-20 µL |
* Ja nepieciešamas citas sistēmas liofilizētai žāvēšanai, lūdzu, konsultējieties atsevišķi.
Liofilizācijas processss
| Procedūra | Temp. | Laiks | Stāvoklis | Spiediens |
| Iepriekšēja sasaldēšana | 4℃ | 30 min | Turiet |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Dzesēšana | ||
| -50 ℃ | 180 min | Turiet | ||
| Primārā žāvēšana | -30℃ | 60 min | Apkure |
Galīgais vakuums |
| -30℃ | 70 min | Turiet | ||
| Sekundārā žāvēšana | 25℃ | 60 min | Apkure |
Galīgais vakuums |
| 25℃ | 300 min | Turiet |
2. Iepriekš minētais liofilizācijas process ir paredzēts tikai atsaucei.Dažādiem produktu veidiem un dažādiem saldēšanas žāvētājiem ir dažādi parametri, tāpēc var veikt pielāgojumus atbilstoši faktiskajamapstākļi lietošanas laikā.
3. Dažādi liofilizācijas procesi var būt piemēroti dažāda lieluma liofilizētā produkta partijāmproduktiem, tāpēc, ja tos izmanto liela mēroga ražošanā, ir jāveic pietiekama testēšanas validācija.
Liofilīzes lietošanas instrukcijad pulveris
1. Īsi centrifugējiet liofilizēto pulveri;
2. Pievienojiet nukleīnskābes šablonu liofilizētajam pulverim un pievienojiet ūdeni līdz 25 µL;
3. Rūpīgi samaisiet, centrifugējot, un darbiniet ar mašīnu.
Kvalitātes kontrole:
1. Funkcionālā pārbaude: qPCR jutība, specifiskums, reproducējamība.
2. Nav eksogēnas nukleāzes aktivitātes, nav eksogēna endo/eksonukleāzes piesārņojuma.
Tehniskā informācija:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG izmanto jaunu karstās palaišanas enzīmu, kas nodrošina ātru karsto palaišanu 1–5 minūšu laikā;izmantojot īpašu bufera formulu, tas ir piemērots daudzkārtējām fluorescējošām kvantitatīvajām PCR reakcijām.
2. Tam ir augstāka specifika, kas ievērojami uzlabo fluorescences kvantitatīvās PCR robežas noteikšanas jutīgumu, normalizējot amplifikācijas līknes, fluorescences vērtība iegūst acīmredzamu uzlabojumu pie zemas koncentrācijas veidnēm, kas ir piemērotas kā augstas jutības fluorescences kvantitatīvās PCR noteikšanas reaģenti.
3. Primeriem ar zemāku atkausēšanas temperatūru vai fragmentiem, kas garāki par 200 bp, ieteicama 3 soļu metode.
4. dUTP izmantošanas efektivitāte un jutība pret UNG enzīmu dažādiem mērķa gēniem atšķiras, tādēļ, ja UNG sistēmas izmantošana noved pie detektēšanas jutības samazināšanās, reakcijas sistēma ir jākoriģē un jāoptimizē.Ja nepieciešams tehniskais atbalsts, lūdzu, sazinieties ar mūsu uzņēmumu.
5. Pirms un pēc pastiprināšanas izmantojiet tam paredzētas zonas un pipetes, darbības laikā valkājiet cimdus un bieži nomainiet tos;neatveriet reakcijas cauruli pēc PCR pabeigšanas, lai samazinātu paraugu piesārņojumu ar PCR produktiem.
