Multiplex One Step RT-qPCR premikss-UNG
Kaķa Nr.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ir multiplekss kvantitatīvs PCR komplekts, kura pamatā ir RNS kā veidne.Eksperimenta procesā vienā mēģenē tika veikta reversā transkripcija un kvantitatīvā PCR, kas vienkāršoja eksperimentālo darbību un samazināja piesārņojuma risku.Šajā komplektā pirmā cDNS virkne tika efektīvi sintezēta ar karstumizturīgu reverso transkriptāzi un kvantitatīvi pastiprināta ar HotStart Tag DNS polimerāzi.Komplektā galvenokārt ir optimizēts MP buferis, enzīmu maisījums utt. Buferšķīdums jau satur Mg2+un dNTP.Turklāt tiek pievienoti faktori, kas var efektīvi kavēt nespecifisko PCR amplifikāciju un uzlabot vairāku qPCR reakciju amplifikācijas efektivitāti, kas var nodrošināt amplifikācijas efektivitāti un veikt līdz pat vairākkārtējai amplifikācijas reakcijai.dUTP/UDG sistēma tika pievienota, lai efektīvi novērstu aerosola piesārņojuma risku.
Sastāvdaļas
1. Buferis
2. Enzīmu maisījums
Specifikācija
| Karstais starts | Iebūvēts karstais starts |
| Atklāšanas metode | Primer-zondes noteikšana |
| PCR metode | Viena soļa RT-qPCR |
| Polimerāze | Taq DNS polimerāze |
| Parauga veids | DNS |
Uzglabāšanas apstākļi
Produkts tiek piegādāts kopā ar sauso ledu, un to var uzglabāt -25 ~ -15 ℃ 1 gadu.No tā vajadzētu izvairīties no biežassasaldēt-atkausēt.Ieteicams krāt atsevišķi.
Instrukcijas
1.Reakcija Sistēma
| Sastāvdaļas | Tilpums (μL) | Galīgā koncentrācija |
| 2 × MP buferis | 12.5 | 1× |
| Enzīmu maisījums | 1 | - |
| Gruntēšanas/zondes maisījums (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Veidnes RNS | 1-10 | - |
| RNāzes brīvs H2O | līdz 25 | - |
Piezīmes:
Pirms lietošanas noteikti labi samaisiet, izvairieties no pārmērīgiem burbuļiem, ko izraisa spēcīga vibrācija.
a.Primer koncentrācija: Grunts maisījums, ieskaitot multipleksu grunti, atkarībā no situācijas optimālā grunts koncentrācija var būt no 0,l līdz 1,0 μM.
b.Zondes koncentrācija: Zondes maisījums, kas ietver multipleksas zondes marķēšanas atšķirības fluorescējošu grupu, atkarībā no situācijas optimālā zondes koncentrācija var būt no 0,05 līdz 0,5 μM.
c.Veidnes atšķaidīšana: qPCR ir ļoti jutīgs, un ir ieteicams veidni atšķaidīt.Kontroles Ct vērtība ir piemērota no 20 līdz 35.
d.Sistēmas sagatavošana: Lūdzu, sagatavojieties uz īpaši tīra darba galda un pipetes un reakcijas caurules bez nukleāzes atlikumiem;ieteicams izmantot pistoles galvu ar filtra elementu.Izvairieties no savstarpējas piesārņošanas un aerosola piesārņojuma.
2. Optimizēta riteņbraukšanaProtokols
| Cikls solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Reversā transkripcija | 50℃a | 20 minūtes | 1 |
| Sākotnējā-denaturācija | 95℃ | 5 min | 1 |
| Pastiprināšanas reakcija | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sek c |
Piezīmes:
a.Reversā transkripcija: temperatūru var izvēlēties 42°C vai 50°C.
b.Pastiprināšanas reakcija: Temperatūra tiek regulēta atbilstoši projektēto praimeru Tm vērtībai.
c.Fluorescences signāla iegūšana: lūdzu, iestatiet eksperimentālo procedūru atbilstoši instrumenta rokasgrāmatas prasībām.
Piezīmes
Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību.
