Multiplex qPCR zondes premikss
Kaķa Nr.: HCB5051A
TaqMan multiplekss qPCR Master Mix (Dye Based) ir iepriekšējs risinājums 2 x reāllaika kvantitatīvai PCR pastiprināšanai, kam raksturīga augsta jutība un specifiskums, kas ir zilā krāsā, un tam ir parauga pievienošanas efekts.Šis produkts ir 2 × Mix iepriekš sajaukts reaģents, kas nodrošina līdz četrām fluorescējošām kvantitatīvām PCR reakcijām vienā reakcijas iedobē.Šis produkts satur ģenētiski modificētu antivielu metodi pret karstās palaišanas Taq enzīmu, ievērojami uzlabojot amplifikācijas jutību un specifiskumu.Tajā pašā laikā šis produkts ir dziļi optimizējis vairāku reakciju buferi, kas var uzlabot reakcijas pastiprināšanas efektivitāti un veicināt zemas koncentrācijas veidņu efektīvu pastiprināšanu.Šo produktu var izmantot genotipa noteikšanai un daudzkārtējai kvantitatīvai analīzei.
Specifikācija
| Karstais starts | Iebūvēts karstais starts |
| Atklāšanas metode | Primer-zondes noteikšana |
| PCR metode | qPCR |
| Polimerāze | Taq DNS polimerāze |
| Parauga veids | DNS |
Uzglabāšanas apstākļi
Produkts tiek piegādāts kopā ar sauso ledu, un to var uzglabāt -25 ~ -15 ℃ temperatūrā 2 gadus.
Instrukcijas
1. ReakcijaSistēma
| Sastāvdaļas | Tilpums (μL) | Galīgā koncentrācija |
| 2 × TaqMan multiplekss qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Gruntēšanas maisījums (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Zondes maisījums (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox atsauces krāsa | 0.5 | 1× |
| DNS/cDNS veidne | 1-10 | - |
| ddH2O | līdz 25 | - |
Piezīmes:Pirms lietošanas rūpīgi samaisiet, lai izvairītos no pārmērīgu burbuļu rašanās no spēcīgas kratīšanas.
a.Primera koncentrācija: Primer Mix satur vairākus gruntskrāsu pārus, parasti katrs primers ar galīgo koncentrāciju 0,2 μmol/L, un to var arī attiecīgi pielāgot no 0,1 līdz 0,5 μmol/L.
b.Zondes koncentrācija: Probe Mix satur vairākas zondes ar dažādiem fluorescences signāliem, un katras zondes koncentrāciju var noregulēt no 50 līdz 250 nmol/L atbilstoši konkrētai situācijai.
1.Rox krāsas atsauce: to izmanto reālā laika PCR pastiprināšanas instrumentos, piemēram, Applied Biosystems, lai labotu starp iedobēm radītā fluorescences signāla kļūdu;šis produkts nesatur Rox krāsas atsauci.Ja nepieciešams, ieteicams izmantot Cas#10200.
2.Veidnes atšķaidīšana: qPCR ir ļoti jutīgs, un lietošanai ieteicams veidni atšķaidīt.Ja veidne ir cDNS izejas šķīdums, veidnes tilpums nedrīkst pārsniegt 1/10 no kopējā tilpuma.
3.Reakcijas sistēma: 25μL, 30μL vai 50 μL ir ieteicams, lai nodrošinātu mērķa gēna amplifikācijas efektivitāti un atkārtojamību.
4.Sistēmas sagatavošana: lūdzu, sagatavojieties īpaši tīrā stendā un izmantojiet uzgaļus un reakcijas caurules bez nukleāzes atlikumiem;uzgaļus ieteicams izmantot ar filtru kasetnēm.Izvairieties no savstarpējas piesārņošanas un aerosola piesārņojuma.
2.Reakcijas programma
| Cikla solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Sākotnējā-denaturācija | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturācija | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Atkausēšana/pagarināšana | 60 ℃ | 30 sek |
Piezīmes:
1.Atkvēlināšana/pagarināšana: temperatūru un laiku var atbilstoši pielāgot atbilstoši plānotajai grunts Tm vērtībai.
2.Fluorescences signāla iegūšana: fluorescences signāla iegūšanas laiks, kas nepieciešams dažādiem qPCR noteikšanas instrumentiem, ir atšķirīgs, lūdzu, iestatiet atbilstoši minimālajam laika ierobežojumam.Vairāku izplatītu instrumentu laiks ir noteikts šādi:
20 sek.: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek.: Applied Biosystems 7300
32 sek.: Applied Biosystems 7500
Piezīmes
Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību!
