Rnase A
Ribonukleāze A (RNaseA) ir vienpavedienu polipeptīds, kas satur 4 disulfīda saites ar molekulmasu aptuveni 13,7 kDa.RNāze A ir endoribonukleāze, kas specifiski noārda vienpavedienu RNS pie C un U atlikumiem.Konkrēti, šķelšanās atpazīst fosfodiestera saiti, ko veido nukleotīda 5'-riboze un fosfātu grupa blakus esošā pirimidīna nukleotīda 3'-ribozē, tādējādi 2,3'-cikliskie fosfāti tiek hidrolizēti līdz atbilstošajiem 3. "nukleozīdu fosfāti (piemēram, pG-pG-pC-pA-pG šķeļ ar RNāzi A, lai iegūtu pG-pG-pCp un A-PG).RNāze A ir visaktīvākā vienpavedienu RNS šķelšanā.Ieteicamā darba koncentrācija ir 1-100 μG/mL, saderīga ar dažādām reakciju sistēmām.Zemu sāls koncentrāciju (0-100 mM NaCl) var izmantot, lai sagrieztu vienpavedienu RNS, divpavedienu RNS un RNS ķēdes, kas veidojas RNS-DNS hibridizācijas rezultātā.
Tomēr pie augstas sāls koncentrācijas (≥0,3 M) RNāze A specifiski šķeļ vienpavedienu RNS.
RNāzi A visbiežāk izmanto, lai noņemtu RNS plazmīdas DNS vai genoma DNS sagatavošanas laikā.Tas, vai DNāze ir aktīva sagatavošanas procesa laikā, var viegli ietekmēt reakciju.DNāzes aktivitātes inaktivēšanai var izmantot tradicionālo vārīšanas metodi ūdens vannā.Šis produkts nesatur DNāzi un proteāzi, un pirms lietošanas tam nav nepieciešama termiskā apstrāde.Turklāt šo produktu var izmantot arī molekulārās bioloģijas eksperimentos, piemēram, RNāzes aizsardzības analīzē un RNS sekvences analīzē.
Uzglabāšanas apstākļi
Produkts jāuzglabā -25 ℃ ~ - 15 ℃ temperatūrā 2 gadus.
Specifikācijas
| Izskats | Pulveris |
| Daudzums | 100 mg / 1 g |
| Produkta veids | RNāze A |
Instrukcijas
Šī ir viena no izplatītākajām metodēm RNāzes A uzglabāšanas šķīduma pagatavošanai.To var arī pagatavotar citām metodēm saskaņā ar tradicionālajām metodēm laboratorijā vai uzziņu literatūrā (piemēram,tieši izšķīdinot 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 vai Tris-NaCl šķīdumā)
1. Izmantojiet 10 mM nātrija acetātu (pH 5,2), lai sagatavotu 10 mg/ml RNāzes A uzglabāšanas šķīdumu.
2. Karsēšana pie 100 ℃ 15 min.
3. Atdzesējiet līdz istabas temperatūrai, pievienojiet 1/10 tilpuma 1 M Tris-HCl (pH 7,4), noregulējiet tā pH uz 7,4 (laiPiemēram, pievienojiet 500 ml 10 mg/ml RNāzes uzglabāšanas šķīduma 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Iepakots -20 ℃ temperatūrā saldētai uzglabāšanai, kas var būt stabils līdz 2 gadiem.
[Piezīmes]:
Vārot RNāzesA šķīdumu neitrālos apstākļos, veidosies RNāzes nogulsnes;Vāra to pie zemāka pH, un, ja ir nokrišņi, tos var novērot, ko var izraisīt olbaltumvielu piemaisījumu klātbūtne.Ja pēc vārīšanas tiek konstatētas nogulsnes, piemaisījumus var noņemt ar ātrgaitas centrifugēšanu (13000 apgr./min) un pēc tam iepakot uzglabāšanai sasaldēšanai.
Piezīmes
Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību.
