Rnāzes inhibitors
Peles RNāzes inhibitors ir rekombinants peles RNāzes inhibitors, kas ekspresēts un attīrīts no E.coli.Tas saistās ar RNāzi A, B vai C attiecībā 1:1, izmantojot nekovalentu saiti, tādējādi kavējot trīs enzīmu aktivitāti un aizsargājot RNS no degradācijas.Tomēr tas nav efektīvs pret Aspergillus RNāzi 1, RNāzi T1, S1 nukleāzi, RNāzi H vai RNāzi.Peles RNāzes inhibitors tika pārbaudīts ar RT-PCR, RT-qPCR un IVT mRNS, un tas bija savietojams ar dažādām komerciālām reversajām transkriptāzēm, DNS polimerāzēm un RNS polimerāzēm.
Salīdzinot ar cilvēka RNāzes inhibitoriem, peles RNāzes inhibitors nesatur divus cisteīnus, kas ir ļoti jutīgi pret oksidāciju, kas izraisa inhibitora inaktivāciju.Tas padara to stabilu zemā DTT koncentrācijā (mazāk nekā 1 mM).Šī funkcija padara to piemērotu lietošanai reakcijās, kurās augsta DTT koncentrācija ir nelabvēlīga reakcijai (piemēram, reāllaika RT-PCR).
Apieteikums
Šo produktu var plaši izmantot jebkurā eksperimentā, kur ir iespējami RNāzes traucējumi, lai izvairītos no RNS degradācijas, piemēram:
1.Pirmās cDNS virknes sintēze, RT-PCR, RT-qPCR utt.
2.Aizsargā RNS no degradācijas in vitro transkripcijas/translācijas laikā (piemēram, in vitro vīrusu replikācijas sistēma).
3.RNāzes aktivitātes kavēšana RNS atdalīšanas un attīrīšanas laikā.
Uzglabāšanas apstākļi
Produktu var uzglabāt temperatūrā -25°- 15 ℃, derīguma termiņš ir 2 gadi.
Uzglabāšanas buferis
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT un 50% glicerīna.
Vienības definīcija
Peles RNāzes inhibitora daudzums, kas nepieciešams, lai inhibētu 5 ng ribonukleāzes A aktivitāti par 50%, tika definēts kā viena vienība (U).
Olbaltumvielu molekulmasa
Peles RNāzes inhibitora molekulmasa ir 50 kDa.
Kvalitātes kontrole
Eksonukleāze Aktivitāte:
40 U peles RNāzes inhibitora ar 1 μg λ-Hind III sagremotas DNS 37 ℃ temperatūrā 16 stundas nerada degradāciju, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
Endonukleāzes aktivitāte:
40 U peles RNāzes inhibitora ar 1 μg λ DNS 37 ℃ temperatūrā 16 stundas nenoārda, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
Nikošana Aktivitāte:
40 U peles RNāzes inhibitora ar 1 μg pBR322 37 ℃ temperatūrā 16 stundas nenoārda, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
RNāze Aktivitāte:
40 U peles RNāzes inhibitora ar 1,6 μg MS2 RNS 4 stundas 37 ℃ temperatūrā nenoārda, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
E.coli DNS:
40 U peles RNāzes inhibitoru pārbauda, lai noteiktu E. coli genoma DNS klātbūtni, izmantojot TaqMan qPCR ar E. coli 16S rRNS lokusam specifiskiem praimeriem.E. coli genoma DNS piesārņojums ir ≤ 0,1 pg/40 U.
Npiezīmes
1. Vardarbīgas svārstības vai maisīšana izraisīs enzīmu inaktivāciju.
2. Šī inhibitora optimālais temperatūras diapazons bija 25-55 ℃, un tas tika inaktivēts 65 ℃ un augstāk.
3. Peles RNāzes inhibitors neinhibēja RNāzes H, RNāzes 1 un RNāzes T1 aktivitātes.
4. RNāzes aktivitātes inhibīcija tika konstatēta plašā pH diapazonā (pH 5-9 bija visi aktīvi), un visaugstākā aktivitāte tika novērota pie pH 7-8.
5. Tā kā ribonukleāzes parasti saglabā aktivitāti denaturēšanas apstākļos, jārūpējas, lai izvairītos no RNāzes inhibitoru molekulu denaturēšanas, kas ir izveidojušas kompleksu ar ribonukleāzi.Lai novērstu aktīvās ribonukleāzes izdalīšanos, jāizvairās no temperatūras, kas pārsniedz 50 °C, un augstas urīnvielas vai citu denaturējošu vielu koncentrācijas.
