DNāze I (bez RNāzes) (5 u/ul)
Kaķa Nr.: HC4007A
DNāze I (dezoksiribonukleāze I) ir endodezoksiribonukleāze, kas var sagremot vienas vai divpavedienu DNS.Tas atpazīst un sašķeļ fosfodiestera saites, lai iegūtu monodeoksinukleotīdus vai vienas vai divpavedienu oligodeoksinukleotīdus ar fosfātu grupām 5'-galā un hidroksilgrupām 3'-galā.DNāzes I aktivitāte ir atkarīga no Ca2+un to var aktivizēt ar divvērtīgiem metālu joniem, piemēram, Mn2+un Zn2+.5 mM Ca2+aizsargā fermentu no hidrolīzes.Mg klātbūtnē2+, ferments varētu nejauši atpazīt un nošķelt jebkuru vietu jebkurā DNS virknē.Mn klātbūtnē2+, DNS dubultās virknes var vienlaicīgi atpazīt un šķelt gandrīz vienā un tajā pašā vietā, veidojot plakanu galu DNS fragmentus vai lipīgu galu DNS fragmentus ar 1-2 nukleotīdiem, kas izvirzīti uz āru.
Sastāvdaļas
| Vārds | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNāze I, bez RNāzes | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNāzes I buferis | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Uzglabāšanas apstākļi
-25℃~-15℃ uzglabāšanai;Pārvadāšana zem ledus iepakojumiem.
Instrukcijas
1. Sagatavojiet reakcijas šķīdumu RNāzes nesaturošā mēģenē atbilstoši tālāk norādītajām proporcijām:
| Komponents | Skaļums |
| RNS | X µg |
| 10 × DNāzes I buferis | 1 μL |
| DNāze I, bez RNāzes (5U/μL) | 1 U uz µg RNS① |
| ddH2O | Līdz 10 μL |
Piezīme: ①Aprēķiniet DNāzes I tilpumu, kas jāpievieno, pamatojoties uz RNS daudzumu.
2. 37 ℃ 15 minūtes;
3. Pievienojiet 0,5 M EDTA līdz galīgajai koncentrācijai 2,5 mM ~ 5 mM un karsējiet 65 ℃ 10 minūtes, lai apturētu reakciju.Paraugu var tieši izmantot nākamajai reakcijai, piemēram, reversajai transkripcijaieksperiments.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā fermenta daudzums, kas pilnībā noārdīs 1 µg pBR322DNS 10 minūtēs 37 ℃.
Kvalitātes kontrole
RNāze:5 U DNāzes I ar 1,6 µg MS2 RNS 4 stundas 37 ℃ temperatūrā nenoārda, jonosaka ar agarozes gēla elektroforēzi.
Piezīmes
1. Lūdzu, sagatavojiet 0.5MEDTA pats.
2. Izmantojiet 1U DNāzi I uz µg RNS.Tomēr, ja RNS ir mazāks par 1 µg, lūdzu, izmantojiet 1U DNāzi I.
3. Lūdzu, novietojiet fermentu uz ledus darbības laikā.
