Rnāzes inhibitors (bez glicerīna)
Peles RNāzes inhibitors ir rekombinants peles RNāzes inhibitors, kas ekspresēts un attīrīts no E.coli.Tas saistās ar RNāzi A, B vai C attiecībā 1:1, izmantojot nekovalentu saiti, tādējādi kavējot trīs enzīmu aktivitāti un aizsargājot RNS no degradācijas.Tomēr tas nav efektīvs pret Aspergillus RNāzi 1, RNāzi T1, S1 nukleāzi, RNāzi H vai RNāzi.Peles RNāzes inhibitors tika pārbaudīts ar RT-PCR, RT-qPCR un IVT mRNS, un tas bija savietojams ar dažādām komerciālām reversajām transkriptāzēm, DNS polimerāzēm un RNS polimerāzēm.
Salīdzinot ar cilvēka RNāzes inhibitoriem, peles RNāzes inhibitors nesatur divus cisteīnus, kas ir ļoti jutīgi pret oksidāciju, kas izraisa inhibitora inaktivāciju.Tas padara to stabilu zemā DTT koncentrācijā (mazāk nekā 1 mM).Šī funkcija padara to piemērotu lietošanai reakcijās, kurās augsta DTT koncentrācija ir nelabvēlīga reakcijai (piemēram, reāllaika RT-PCR).
Apieteikums
Šo produktu var plaši izmantot jebkurā eksperimentā, kur ir iespējami RNāzes traucējumi, lai izvairītos no RNS degradācijas, piemēram:
1.Pirmās virknes cDNS sintēze, RT-PCR, RT-qPCR utt.;
2.Aizsargāt RNS no degradācijas in vitro transkripcijā/translācijā (piemēram, vīrusa replikācija in vitro);
3.RNāzes aktivitātes kavēšana RNS izolēšanas un attīrīšanas laikā.
Uzglabāšanas apstākļi
Uzglabāt temperatūrā -25 ～-15 ℃;
sasaldēšanas-atkausēšanas cikli ≤ 5 reizes;
Derīgs 1 gadu.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā RNāzes inhibitora daudzums, kas nepieciešams, lai par 50% inhibētu 5 ng RNāzes A aktivitāti.
Molekulārais svars
RNāzes inhibitors (bez glicerīna) ir 50 kDa proteīns.
Kvalitātes kontrole
Eksonukleāze Aktivitāte:
Inkubējot 40 U fermenta ar 1 μg λ-Hind III sagremotas DNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, netika konstatēta DNS noārdīšanās, kā noteikts ar gēla elektroforēzi.
Endonukleāzes aktivitāte:
Inkubējot 40 U fermenta ar 1 μg λ DNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, netika konstatēta DNS noārdīšanās, ko noteica ar gēla elektroforēzi.
Nikošana Aktivitāte:
Inkubējot 40 U enzīma ar 1 μg pBR322 16 stundas 37 ℃ temperatūrā, netika konstatēta DNS noārdīšanās, kā noteikts ar gēla elektroforēzi.
RNāze Aktivitāte:
Inkubējot 40 U enzīma ar 1,6 μg MS2 RNS 4 stundas 37 ℃ temperatūrā, netika konstatēta RNS noārdīšanās, kā noteikts ar gēla elektroforēzi.
E.coli DNS:
TaqMan qPCR nosaka 40 U enzīma.E.coli DNS ir ≤ 0,1 pg/40U.
Npiezīmes
1. Nekratiet un nemaisiet spēcīgi, lai novērstu fermentu inaktivāciju.
2.RNāzes inhibitors ir aktīvs temperatūrā no 25℃ līdz 55℃ un tiek inaktivēts pie ≥65℃.
3. RNāzes H, RNāzes 1 un RNāzes T1 aktivitāte netiek kavēta.
4. RNāzes aktivitātes inhibēšanas pH diapazons ir plašs (aktīvs pie pH 5-9), uzrādot maksimālo aktivitāti pie pH 7-8.
