Vīrusu DNS/RNS ekstrakcijas komplekts
Šis komplekts ir piemērots ātrai augstas tīrības vīrusu DNS/RNS ekstrakcijai no tādiem paraugiem kā nazofaringijas uztriepes, vides uztriepes, šūnu kultūras supernatanti un audu homogenāta supernatanti.Komplekta pamatā ir silīcija dioksīda membrānas attīrīšanas tehnoloģija, kas novērš nepieciešamību izmantot fenola/hloroforma organiskos šķīdinātājus vai laikietilpīgu spirta izgulsnēšanu, lai iegūtu augstas kvalitātes vīrusu DNS/RNS.Iegūtās nukleīnskābes ir bez piemaisījumiem un ir gatavas lietošanai pakārtotajos eksperimentos, piemēram, reversajā transkripcijā, PCR, RT-PCR, reāllaika PCR, nākamās paaudzes sekvencēšanā (NGS) un Northern blot.
Uzglabāšanas apstākļi
Uzglabāt 15 ~ 25 ℃ un transportēt istabas temperatūrā
Sastāvdaļas
| Sastāvdaļas | 100RXNS |
| Buferis VL | 50 ml |
| Buferis RW | 120 ml |
| RNāzes nesaturošs ddH2O | 6 ml |
| FastPure RNS kolonnas | 100 |
| Savākšanas tūbiņas (2ml) | 100 |
| RNāzes nesaturošas savākšanas tūbiņas (1,5 ml) | 100 |
Buferis VL:Nodrošiniet vidi līzei un saistīšanai.
Buferis RW:Noņemiet atlikušos proteīnus un citus piemaisījumus.
RNāzes nesaturošs ddH2O:Eluējiet DNS/RNS no membrānas centrifūgas kolonnā.
FastPure RNS kolonnas:Īpaši adsorbē DNS/RNS.
Savākšanas tūbiņas 2 ml:Savāc filtrātu.
RNāzes nesaturošas savākšanas tūbiņas 1,5 ml:Savākt DNS/RNS.
Lietojumprogrammas
Nazofaringijas uztriepes, vides uztriepes, šūnu kultūras supernatanti un audu homogenāta supernatanti.
Pašu sagatavota Materials
RNāzes nesaturoši pipetes uzgaļi, 1,5 ml RNāzes nesaturošas centrifūgas mēģenes, centrifūga, virpuļmaisītājs un pipetes.
Eksperimenta process
Veiciet visas tālāk norādītās darbības bioloģiskās drošības skapī.
1. Pievienojiet 200 μl parauga centrifūgas mēģenē, kurā nav RNāzes (nepietiekama parauga gadījumā papildiniet ar PBS vai 0,9% NaCl), pievienojiet 500 μl buferšķīduma VL, labi samaisiet, vorteksot 15–30 sekundes, un centrifugējiet. īsi, lai savāktu maisījumu caurules apakšā.
2. Ievietojiet FastPure RNA kolonnas savākšanas mēģenēs 2 ml.Pārnesiet maisījumu no 1. posma uz FastPure RNA kolonnām, centrifugējiet ar ātrumu 12 000 apgr./min (13 400 × g) 1 minūti un filtrātu izmetiet.
3. Pievienojiet 600 μl buferšķīduma RW FastPure RNA kolonnām, centrifugējiet pie 12 000 apgr./min (13 400 × g) 30 sekundes un izmetiet filtrātu.
4. Atkārtojiet 3. darbību.
5. Centrifugējiet tukšo kolonnu ar ātrumu 12 000 apgr./min (13 400 × g) 2 minūtes.
6. Uzmanīgi pārnesiet FastPure RNA kolonnas jaunās 1,5 ml savākšanas mēģenēs, kas nesatur RNāzi (iekļautas komplektā), un pievienojiet 30–50 μl RNāzes nesaturoša ddH2O membrānas centrā, nepieskaroties kolonnai.Ļaujiet nostāvēties istabas temperatūrā 1 minūti un centrifugējiet pie 12 000 apgr./min (13 400 × g) 1 minūti.
7. Izmetiet FastPure RNS kolonnas.DNS/RNS var izmantot tieši turpmākajām pārbaudēm vai uzglabāt -30 ~ -15°C īsu laiku vai -85 ~ -65°C ilgāku laiku.
Piezīmes
Izmantošanai tikai pētniecībā.Nav paredzēts lietošanai diagnostikas procedūrās.
1. Iepriekš līdzsvarojiet paraugus līdz istabas temperatūrai.
2. Vīrusi ir ļoti infekciozi.Pirms eksperimenta, lūdzu, veiciet visus nepieciešamos drošības pasākumus.
3. Izvairieties no atkārtotas parauga sasaldēšanas un atkausēšanas, jo tas var izraisīt ekstrahētās vīrusa DNS/RNS degradāciju vai samazinātu iznākumu.
4. Pašsagatavotajā aprīkojumā ietilpst pipetes uzgaļi bez RNāzes, 1,5 ml RNāzes nesaturošas centrifūgas mēģenes, centrifūga, virpuļmaisītājs un pipetes.
5. Izmantojot komplektu, valkājiet laboratorijas mēteli, vienreizējās lietošanas lateksa cimdus un vienreizējās lietošanas masku un izmantojiet RNāzes nesaturošus palīgmateriālus, lai samazinātu RNāzes piesārņojuma risku.
6. Veiciet visas darbības istabas temperatūrā, ja vien nav norādīts citādi.
Mehānisms un darbplūsma
