One Step RT-qPCR SYBR zaļais premikss
Kaķa Nr.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix ir paredzēts fluorescences kvantitatīvai noteikšanai, pamatojoties uz SYBR Green I krāsvielu.Izmantojot gēnu specifiskos primerus, reversās transkripcijas un qPCR reakcijas tiek pabeigtas vienā mēģenē, novēršot nepieciešamību pēc atkārtotām vāciņa atvēršanas un pipetes operācijām, ievērojami uzlabojot testa efektivitāti un samazinot piesārņojuma risku.RNS paraugiem komplektā tiek izmantota karstumizturīga reversā transkriptāze efektīvai cDNS sintēzei un HotStart Taq DNS polimerāze kvantitatīvai amplifikācijai.Izmantojot optimizēto bufera sistēmu, komplekta jutība var būt līdz 0,1 pg ļoti izteiktiem mērķiem un līdz 1 pg mēreni izteiktiem mērķiem.Komplekts ir piemērots DNS paraugu amplifikācijai un kvantitatīvai noteikšanai.Tas ļauj jutīgi noteikt un kvantitatīvi noteikt nukleīnskābju no dažādiem augu un dzīvnieku paraugiem, šūnām un mikroorganismiem.
Sastāvdaļas
| No | Vārds | Skaļums | Skaļums |
| 1 | Papildu buferis | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Uzlabots enzīmu maisījums | 20 μL | 200 μl |
| 3 | RNāzes brīvs H2O | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
Uzglabāšanas apstākļi
Šis produkts 1 gadu jāuzglabā temperatūrā -25 ~ -15 ℃ prom no gaismas.
Instrukcijas
1.Reakcijas sistēmas konfigurācijad
| Sastāvdaļas | Tilpums (μL) | Tilpums (μL) | Galīgā koncentrācija |
| Papildu buferis | 12.5 | 25 | 1× |
| Uzlabots enzīmu maisījums | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reversais gruntējums (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNS Tamplateb | X | X | - |
| RNāzes brīvs H2Oc | līdz 25 | līdz 50 | - |
Piezīmes:
1) a.Tgalīgā praimera koncentrācija bija 0,2 μmol/L, ko arī attiecīgi varēja noregulēt no 0,1 līdz 1 μmol/L.
2) b.Reaģents ir ārkārtīgi jutīgs, ar kopējo RNS diapazonā no 1 pg-1 μg, un cilvēka paraugu testēšana uzrādīja optimālu ievadi 1 pg-100 ng, kontrolējot kopējo Ct vērtību diapazonā no 15 līdz 30.
3) c.Ieteicams izmantot 20 μL vai 50 μL, lai nodrošinātu mērķa gēna amplifikācijas derīgumu un reproducējamību.
4) d.Lūdzu, sagatavojieties īpaši tīrā stendā un izmantojiet uzgaļus un reakcijas caurules, kas nesatur nukleāzes atlikumus;ieteicami uzgaļi ar filtru kasetnēm.Izvairieties no savstarpējas piesārņošanas un aerosola piesārņojuma.
2.Reakcijas programma
| Cikla solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Reversā transkripcija | 50℃a | 6 minūtes | 1 |
| Sākotnējā denaturācija | 95℃ | 5 min | 1 |
| Pastiprināšanas reakcija | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Kušanas līknes stadija | Instrumenta noklusējuma iestatījumi | 1 | |
Piezīmes:
1) a.Reversās transkripcijas temperatūru var izvēlēties starp 50-55°C atbilstoši eksperimentālajām vajadzībām.DNS paraugiem reversās transkripcijas procesu var izlaist.
2) b.Īpašos gadījumos atlaidināšanas/pagarināšanas temperatūru var noregulēt atbilstoši gruntējuma Tm vērtībai, ieteicama 60°C.
Piezīmes
1. Šis produkts ir paredzēts tikai izpētei.
2. Savas drošības labad izmantojiet laboratorijas mēteļus un vienreizējās lietošanas cimdus.
