Peļu genotipēšanas komplekts

Kaķa Nr.: HCR2021A

Šis produkts ir komplekts, kas paredzēts ātrai peļu genotipu identificēšanai, ieskaitot DNS neapstrādātas ekstrakcijas un PCR amplifikācijas sistēmu.Produktu var izmantot PCR amplifikācijai tieši no peles astes, auss, pirksta un citiem audiem pēc vienkāršas šķelšanas ar Līzes buferi un Proteinase k.Nav nekādas nakts fermentācijas, fenola-hloroforma ekstrakcijas vai kolonnas attīrīšanas, kas ir vienkārši un saīsina eksperimentu laikietilpīgo darbību.Produkts ir piemērots mērķa fragmentu pastiprināšanai līdz 2kb un daudzkārtējām PCR reakcijām ar līdz 3 praimeru pāriem.2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix satur ģenētiski modificētu DNS polimerāzi, Mg²⁺, dNTP un optimizēta bufersistēma, lai nodrošinātu augstu amplifikācijas efektivitāti un inhibitoru toleranci, lai PCR reakcijas varētu veikt, pievienojot veidni un primerus un rehidrējot produktu līdz 1 ×.PCR produktam, kas pastiprināts ar šo produktu, ir pamanāma “A” bāze 3′ galā, un to var izmantot tieši TA klonēšanai pēc attīrīšanas.

Sastāvdaļas

Uzglabāšanas apstākļi

Produkti jāuzglabā -25 ~ -15 ℃ 2 gadus.Pēc atkausēšanas Līzes buferi var uzglabāt 2–8 ℃ temperatūrā īslaicīgai vairākkārtējai lietošanai, un lietošanas laikā to labi samaisa.

Pieteikums

Šis produkts ir piemērots peles izsitumu analīzei, transgēnu noteikšanai, genotipa noteikšanai un tā tālāk.

Iespējas

1.Vienkārša darbība: nav nepieciešams iegūt genoma DNS;

2.Plašs pielietojums: piemērots dažādu peles audu tiešai pastiprināšanai.

Instrukcijas

1.Genomiskās DNS atbrīvošanās

1) Lizāta sagatavošana

Audu lizātu sagatavo atbilstoši lizējamo peļu paraugu skaitam (audu lizāts jāsagatavo uz vietas atbilstoši devai un kārtīgi jāsamaisa lietošanai), un vienam paraugam nepieciešamo reaģentu proporcija ir šāda:

2) Paraugu sagatavošana un līze

Ieteicamā audu lietošana

Paņemiet atbilstošu daudzumu peles audu paraugu tīrās centrifūgas mēģenēs, pievienojiet 200 μL svaiga audu lizāta katrā centrifūgas mēģenē, samaisiet un sakratiet, pēc tam inkubējiet 55 ℃ 30 minūtes un pēc tam karsējiet 98 ℃ 3 minūtes.

3) Centrifugēšana

Labi sakratiet lizātu un centrifugējiet ar ātrumu 12 000 apgr./min 5 minūtes.Supernatantu var izmantot kā veidni PCR amplifikācijai.Ja veidne ir nepieciešama uzglabāšanai, pārnesiet supernatantu citā sterilā centrifūgas mēģenē un uzglabājiet -20 ℃ 2 nedēļas.

2.PCR pastiprināšana

Noņemiet 2 × Mouse Tissue Direct PCR maisījumu no -20 ℃ un atkausējiet uz ledus, samaisiet otrādi un sagatavojiet PCR reakcijas sistēmu saskaņā ar šo tabulu (darbiniet uz ledus):

Piezīme:

a) Pievienotais daudzums nedrīkst pārsniegt 1/10 no sistēmas, un, ja tiek pievienots pārāk daudz, PCR amplifikācija var tikt kavēta.

Ieteicamie PCR nosacījumi

Piezīme:

a) Atkausēšanas temperatūra: Atsaucoties uz gruntskrāsas Tm vērtību, ir ieteicams iestatīt atlaidināšanas temperatūru uz mazāku gruntskrāsas Tm vērtību +3 ~ 5 ℃.

Biežākās problēmas un risinājumi

1.Nav mērķētu sloksņu

1) Pārmērīgs līzes produkts.Izvēlieties atbilstošāko šablona daudzumu, parasti ne vairāk kā 1/10 no sistēmas;

2) Pārāk liels izlases lielums.Lizātu atšķaida 10 reizes un pēc tam pastiprina vai samazina parauga lielumu un veic atkārtotu līzi;

3) Audu paraugi nav svaigi.Ieteicams izmantot svaigus audu paraugus;

4) Slikta grunts kvalitāte.Izmantojiet genoma DNS amplifikācijai, lai pārbaudītu praimera kvalitāti un optimizētu praimera dizainu.

2.Nespecifiska pastiprināšana

1) Atlaidināšanas temperatūra ir pārāk zema, un cikla numurs ir pārāk augsts.Palieliniet atkausēšanas temperatūru un samaziniet ciklu skaitu;

2) Veidņu koncentrācija ir pārāk augsta.Samaziniet šablona daudzumu vai atšķaidiet veidni 10 reizes pēc pastiprināšanas;

3) Slikta primera specifika.Optimizējiet gruntskrāsu dizainu.

Piezīmes

1.Lai izvairītos no paraugu savstarpējas inficēšanās, ir jāsagatavo vairāki paraugu ņemšanas instrumenti, un instrumentu virsmu pēc katras parauga ņemšanas var notīrīt ar 2% nātrija hipohlorīta šķīdumu vai nukleīnskābes tīrīšanas līdzekli, ja nepieciešama atkārtota lietošana.

2.Ieteicams izmantot svaigus peļu audus, un paraugu ņemšanas apjoms nedrīkst būt pārāk liels, lai neietekmētu pastiprināšanas rezultātus.

3.Līzes buferšķīdumam ir jāizvairās no biežas sasalšanas un atkausēšanas, un to var uzglabāt 2–8 ℃ temperatūrā īslaicīgai vairākkārtējai lietošanai.Uzglabājot zemā temperatūrā, var rasties nokrišņi, un pirms lietošanas tie pilnībā jāizšķīdina.

4.PCR maisījumam jāizvairās no biežas sasaldēšanas un atkausēšanas, un to var uzglabāt 4 ℃ temperatūrā īslaicīgai atkārtotai lietošanai.

5.Šis produkts ir paredzēts tikai zinātniskiem eksperimentāliem pētījumiem, un to nedrīkst izmantot klīniskai diagnostikai vai ārstēšanai.