2 × HiF Taq plus Master Mix
Kaķa Nr.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (ar krāsvielu) ir lietošanai gatavs 2x iepriekš sajaukts šķīdums, kas satur Plus HIF DNS polimerāzi, dNTP un optimizētu buferi.Divas monoklonālas antivielas istabas temperatūrā, kas inhibē polimerāzes aktivitāti un 3′→5′eksonukleāzes aktivitāti, tiek pievienotas galvenajam maisījumam, lai viegli un ļoti specifiski Hot Start PCR.Pagarinājuma koeficients tiek pievienots galvenajam maisījumam, lai fermentam piešķirtu garu fragmentu pastiprināšanas spēju, amplifikācijas garums var būt līdz 13 kb, fermentam ir 5′→3′ DNS polimerāzes aktivitāte un 3′→5′. eksonukleāzes aktivitāte, tās precizitāte ir 83 reizes lielāka nekā Taq DNS polimerāzei, kas ir 9 reizes lielāka nekā parastajai DNS polimerāzei.Tas ir piemērots sarežģītu veidņu pastiprināšanai, pastiprināšanas produkts ir neass gals.
2 × HIF Taq plus Master Mix (ar krāsu) ir ātras un vienkāršas priekšrocības, augsta jutība, spēcīga specifika, laba stabilitāte utt., reakcijas sistēmai ir jāpievieno tikai grunti un veidnes, un to var pastiprināt ar divu veidu soļu protokols, vienkāršojot eksperimentālās darbības un ietaupot laiku.Šis produkts satur elektroforēzes indikatorkrāsvielas, un PCR produktus var izmantot tieši elektroforēzei.Turklāt produkts satur arī īpašu aizsargvielu, lai galvenais maisījums varētu saglabāt stabilu aktivitāti pēc atkārtotas sasaldēšanas-atkausēšanas.
Uzglabāšanas apstākļi
Produkti jāuzglabā -25 ~ -15 ℃ 1 gadu.
Specifikācijas
| Produkta specifikācija | Master Mix |
| Koncentrēšanās | 2× |
| Karstais starts | Iebūvēts karstais starts |
| Pārkare | Strups |
| Reakcijas ātrums | Strauji |
| Izmērs (gala produkts) | Līdz 13 kb |
| Pārvadāšanas nosacījumi | Sausais ledus |
| Produkta veids | Augstas precizitātes PCR premiksi |
Instrukcijas
1.PCR reakcijas sistēma
| Sastāvdaļas | Tilpums (μL) |
| DNS veidne | Piemērots |
| Forward primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reversais gruntējums (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | līdz 50 |
2.Ieteicams izmantot dažādas veidnes
| Veidnes veids | Pastipriniet fragmentus no 1 kb līdz 10 kb |
| Genomiskā DNS | 50 ng-200 ng |
| Plazmīda vai vīrusu DNS | 10pg-20ng |
| cDNS | 1-2,5 µL (Nepārsniedziet 10% no galīgās PCR reakcijas tilpuma) |
3.Pastiprināšanas protokols
1) Divpakāpju protokols (sarežģītības veidne)
| Cikla solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Sākotnējā denaturācija | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturācija | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Pagarinājums | 68℃ | 30 sek/kb | |
| Pēdējais pagarinājums | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Trīspakāpju protokols (parastais protokols)
| Cikla solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Sākotnējā denaturācija | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturācija | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Atkausēšana | 60℃ | 20 sek | |
| Pagarinājums | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Pēdējais pagarinājums | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Atlaidināšanas gradienta protokols (sarežģītības veidne)
| Cikla solis | Temperatūra | Laiks | Cikli |
| Sākotnējā denaturācija | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturācija | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ samazinājums ciklā) |
| Gradienta atkausēšana | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Pagarinājums | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Denaturācija | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Atkausēšana | 55℃ | 20 sek | |
| Pagarinājums | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Pēdējais pagarinājums | 72℃ | 5 min | 1 |
Funkcijas saskaņā ar dažādu pastiprināšanas protokolu
| Protocol | Divpakāpju | Trīspakāpju | Gradienta atkausēšana |
| Spec. | ātri | vidējs | lēns |
| Specifiskums | augsts | vidējs | augsts |
| PCR iznākums | vidējs | augsts | vidējs |
| Atklāšanas ātrums | augsts | vidējs | augsts |
Piezīmes
Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību!
