UDG/UNG enzīmi
UDG (uracila DNS glikozilāze) var katalizēt N-glikozīdu saites hidrolīzi starp uracila bāzi un cukura-fosfāta mugurkaulu ssDNS un dsDNS.Tas var viegli kontrolēt aerosola piesārņojumu un ir piemērots kopējām molekulārās bioloģijas sistēmām, piemēram, PCR, qPCR, RT-qPCR un LAMP.
Specifikācijas
| Izteiksmes resursdators | Rekombinantā E. coli ar uracila DNS glikozilāzes gēnu |
| Molekulārais svars | 24. 8kDa |
| Tīrība | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Siltuma inaktivācija | 95℃, 5-10 min |
| Vienības definīcija | Viena vienība (U) tiek definēta kā fermenta daudzums, kas nepieciešams, lai katalizētu l μg dU saturošas dsDNS hidrolīzi 30 minūtēs 25 ℃ temperatūrā. |
Uzglabāšana
Produkts jāuzglabā -25℃ ~ -15°C temperatūrā divus gadus.
Instrukcijas
1.PCR reakcijas maisījuma sagatavošana saskaņā ar šādu sistēmu
| Sastāvdaļas | Tilpums (μL) | Galīgā koncentrācija |
| 10 × PCR buferis (Mg²+plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/izplūdums) | 1 | 0,2 mmol/izplūdums |
| Veidnes DNS | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNS polimerāze (5 U/μl) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracila DNS glikozilāze (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Līdz 50 | - |
Piezīme: Atbilstoši eksperimentālajām prasībām dUTP galīgo koncentrāciju var noregulēt robežās no 0,2 līdz 0,6 mmol/L, un dTTP var pievienot selektīvi 0,2 mmol/l.
2.Pastiprināšanas procedūra
| Cikla solis | Temperatūra | Laiks | Cikli |
| dU saturoša veidnes degradācija | 25℃ | 10 minūtes | 1 |
| UDG aktivizēšana, veidnes sākotnējā denaturācija | 95℃ | 5 ~ 10 minūtes | 1 |
| Denaturācija | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Atkausēšana | 60℃ | 20 sek | |
| Pagarinājums | 72℃ | 30 s/kb | |
| Pēdējais pagarinājums | 72℃ | 5 min | 1 |
Piezīme: Reakcijas laiku 25°C var noregulēt 5-10 minūšu laikā atbilstoši eksperimentālajām prasībām.
Piezīmes
1.UDG ir aktīvs lielākajā daļā PCR reakcijas buferu.
2.Lietojot fermentus, tie jāuzglabā ledusskapī vai ledus vannā, un tūlīt pēc lietošanas tie jāuzglabā -20°C.
3.Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību!
