Warm Start Bst 2.0 DNS polimerāze (bez glicerīna)
Bst DNS polimerāze V2 ir iegūta no Bacillus stearothermophilus DNS polimerāzes I, kurai ir 5′→3′ DNS polimerāzes aktivitāte un spēcīga ķēdes aizstāšanas aktivitāte, bet nav 5′→3′ eksonukleāzes aktivitātes.Bst DNS polimerāze V2 ir ideāli piemērota virkņu pārvietošanai, izotermiskai amplifikācijai LAMP (cilpas mediēta izotermiska amplifikācija) un ātrai sekvencēšanai.Bst DNS polimerāze V2 ir karstās palaišanas versija, kuras pamatā ir Bst DNS polimerāze V2 (HC5005A), kas iegūta ar atgriezeniskas modifikācijas tehnoloģiju, kas var inhibēt DNS polimerāzes aktivitāti istabas temperatūrā, tāpēc reakcijas sistēmu var darbināt un formulēt istabas temperatūrā, lai novērstu -īpaša pastiprināšana un reakcijas efektivitātes uzlabošana, un šo versiju var liofilizēt.Turklāt tā aktivitāte tiek atbrīvota augstā temperatūrā, tāpēc nav nepieciešams atsevišķs aktivizācijas solis.
Sastāvdaļas
| Komponents | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNS polimerāze V2 (bez glicerīna) (8 U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Lietojumprogrammas
1.LAMP izotermiskā pastiprināšana
2.DNS virknes vienas pārvietošanas reakcija
3.Augsta GC gēnu sekvencēšana
4.DNS sekvencēšana nanogramu līmenī.
Uzglabāšanas stāvoklis
Transportēšana zem 0°C un jāuzglabā -25°C~-15°C.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā fermenta daudzums, kas 30 minūtēs 65 °C temperatūrā iekļauj 25 nmol dNTP skābē nešķīstošā materiālā.
Kvalitātes kontrole
1.Olbaltumvielu tīrības tests (SDS-PAGE):Bst DNS polimerāzes V2 tīrība ir ≥99% noteikta ar SDS-PAGE analīzi, izmantojot Coomassie Blue noteikšanu.
2.EndonukleāzeAktivitāte:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1 μg λDNS 16 stundas 37 ℃ temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
3.Eksonukleāzes aktivitāte:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1 μg λ-Hind Ⅲ sagremotas DNS 16 stundas 37 ℃ temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
4.Nikase darbība:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1 μg pBR322 DNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
5.RNāzes aktivitāte:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1,6 μg MS2 RNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
6.E. coliDNS:120 U Bst DNS polimerāzes V2 pārbauda uz E. coli genoma DNS klātbūtni, izmantojot TaqMan qPCR ar E. coli 16S rRNS lokusam specifiskiem praimeriem.E. coli genoma DNS piesārņojums ir ≤1 kopija.
LAMPAS reakcija
| Sastāvdaļas | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (katrs 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μL |
| Grunts maisījumsb | 6 μL |
| Bst DNS polimerāze V2 (bez glicerīna) (8 U/ul) | 1 μL |
| Veidne | × μL |
| ddH₂O | Līdz 25 μL |
Piezīmes:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): atbilstoši eksperimentālām vajadzībām kā aizstājējus var izmantot citas krāsvielas;
2) b.Gruntēšanas maisījums: iegūts, sajaucot 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB un citus tilpumus.
Reakcija un stāvoklis
1 × HC Bst V2 buferšķīdums, inkubācijas temperatūra ir no 60°C līdz 65°C.
Siltuma inaktivācija
80°C, 20 min
