RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Šis produkts satur reakcijas buferi, RT-Enzymes Mix (Bst DNS polimerāzi un karstumizturīgu reverso transkriptāzi), liofilizētus aizsarglīdzekļus un hromogēnas krāsvielas komponentus.Lai izmantotu, vienkārši izmantojiet buferšķīdumu, reakcijas enzīms un grunts tiek sajaukti un pievienoti veidnei;liofilizēta aizsarglīdzekļa pievienošana var būt taisna.Tas tika savienots ar liofilizatoru un liofilizēts, un lietošanas laikā tika pievienoti tikai grunti un veidnes.Šis komplekts nodrošina ātru, skaidru vizuālu pastiprinājuma noteikšanu, kura negatīvā reakcija ir norādīta sarkanā krāsā, bet pozitīvā reakcija tiek norādīta ar pāreju uz dzeltenu.
Komponents
| Komponents | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Ar cilpas starpniecību saistīts pastiprināšanas buferis (ar krāsvielu) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-enzīmu maisījums | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Liofilizēts aizsarglīdzeklis | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Lietojumprogrammas
DNS vai RNS izotermiskai amplifikācijai.
Uzglabāšanas apstākļi
Transportēts ar sauso ledu, uzglabāts -25 ~ -15 ℃.Izvairieties no biežas sasaldēšanas-atkausēšanas, produkts ir derīgs 12 mēnešus.
Protokols
1.Izmantojamo reakcijas buferšķīdumu atkausē istabas temperatūrā.Īsi vorteksiet vai vairākas reizes apgrieziet mēģenes, lai rūpīgi sajauktos, pēc tam centrifugējiet, lai savāktu šķidrumu mēģenes apakšā.
2.Reakcijas sistēmas sagatavošana.Šo reaģentu var pagatavot divās reakcijas sistēmās: šķidrā reakcijas maisījumā un liofilizētās sistēmas maisījumā.
1) Sagatavojiet šķidru reakcijas maisījumu
| Komponents | Skaļums |
| Ar cilpas starpniecību saistīts pastiprināšanas buferis (ar krāsvielu) | 10 μL |
| RT-enzīmu maisījums | 2,8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNS/RNS veidnes b | × μL |
| Ūdens bez kodola | Līdz 50 μL |
2) Liofilizācijas sistēmas maisījums
① Sagatavojiet liofilizētu maisījumu
| Komponents | Skaļums |
| Ar cilpas starpniecību saistīts pastiprināšanas buferis (ar krāsvielu) | 10 μL |
| Liofilizēts aizsarglīdzeklis | 20 μL |
| RT-enzīmu maisījums | 2,8 μL |
| Ūdens bez kodola | Līdz 50 μL |
② Liofilizācija: sagatavotais maisījums tika liofilizēts 50 μl sistēmā
③ Sagatavojiet reakcijas maisījumu
| Komponents | Skaļums |
| Liofilizēts maisījums | 1 gab |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNS/RNS veidnes b | × μL |
| Ūdens bez kodola | Līdz 50 μL |
Piezīmes:
1) a.10 × Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM cilpa F/B;
2) b.DEPC (ūdenī šķīstošs) ieteicams lietot nukleīnskābju templ.
1.Inkubēt 65°C temperatūrā 30-45 minūtes, ko var attiecīgi pagarināt atkarībā no krāsas maiņas Reakcijas laika.
2.Saskaņā ar neapbruņotu aci dzeltenā krāsa bija pozitīva, bet sarkanā - negatīva.
Piezīmes
1.Sāls var parādīties bufera mēģenes apakšā, īsi virpuļot vai vairākas reizes apgriezt mēģenes, lai rūpīgi sajauktos istabas temperatūrā.
2.Reakcijas temperatūru var optimizēt no 62 ℃ līdz 68 ℃ atbilstoši gruntskrāsu stāvoklim.
3.Iesaiņotos reaģentus nedrīkst ilgstoši pakļaut gaisa iedarbībai.
4.Sarkanās un dzeltenās krāsas maiņas reakcija ir atkarīga no reakcijas sistēmas pH izmaiņām, lūdzu, neizmantojiet Tris nukleīnskābju uzglabāšanas šķīdumu, ieteicams izmantot ddH2O uzglabātā nukleīnskābe;
5.Eksperimentam jābūt standartizētam, ieskaitot reakcijas sistēmas sagatavošanu, liofilizāciju un parauga apstrādi un paraugu pievienošanas procesu;
6.Lai izvairītos no piesārņojuma, reakcijas sistēmu ieteicams sagatavot īpaši tīrā stendā, citos Pievienojiet veidnes telpas dūmu nosūcējam, lai izvairītos no viltus pozitīviem traucējumiem.
