Robustart Taq DNS polimerāze

Robustart Taq DNS polimerāze ir karstās palaišanas DNS polimerāze.Šis produkts var ne tikai labāk kavēt nespecifisko reakciju, ko izraisa primeru nespecifiskā atkausēšana vai praimeru agregācija PCR sistēmas sagatavošanas un pastiprināšanas procesā.Tāpēc tam ir lieliska specifika un tas ir efektīvāks zemas koncentrācijas veidņu pastiprināšanai, un tas ir piemērots multipleksētai PCR amplifikācijas reakcijai.Turklāt šim produktam ir ļoti laba pielietojamība, un dažādu veidu PCR reakcijās var iegūt stabilus amplifikācijas rezultātus.

Sastāvdaļas

1.5 U/μL Robustart Taq DNS polimerāze

2.10 × PCR buferis II (bez Mg²+) (pēc izvēles)

3.25 mM MgCl₂(neobligāti)

* 10 × PCR buferis II (bez Mg²+) nesatur dNTP un Mg²+, lūdzu, pievienojiet dNTP un MgCl₂gatavojot reakcijas sistēmu.

Ieteicamās lietojumprogrammas

1.Ātra pastiprināšana.

2.Daudzkārtēja pastiprināšana.

3.Tieša asins, tamponu un citu paraugu pastiprināšana.

4.Elpošanas ceļu slimību noteikšana.

Uzglabāšanas stāvoklis

-20°C ilgstošai uzglabāšanai, pirms lietošanas labi jāsamaisa, izvairieties no biežas sasaldēšanas-atkausēšanas.

*Ja pēc atdzesēšanas rodas nokrišņi, tas ir normāli;pirms maisīšanas un lietošanas ieteicams līdzsvarot līdz istabas temperatūrai.

Vienības definīcija

Viena aktīvā vienība (U) tiek definēta kā fermenta daudzums, kas 74 °C temperatūrā 30 minūtes iekļauj 10 nmol dezoksiribonukleotīda skābē nešķīstošā materiālā, izmantojot aktivētu laša spermas DNS kā veidni/praimeri.

Kvalitātes kontrole

1.SDS-PAGE elektroforētiskā tīrība ir lielāka par 98%.

2.Pastiprināšanas jutība, partiju kontrole, stabilitāte.

3.Nav eksogēnas nukleāzes aktivitātes, nav eksogēnas endonukleāzes vai eksonukleāzes piesārņojuma

Instrukcijas

Reakcijas iestatīšana

Piezīmes:

1) a.Buferis nesatur dNTP un Mg²+, lūdzu, pievienojiet dNTP un MgCl₂gatavojot reakcijas sistēmu.

2) b.Ja izmanto qPCR/qRT-PCR, reakcijas sistēmai jāpievieno fluorescējošās zondes.Parasti 0,2 μM galīgā grunts koncentrācija dos labus rezultātus;ja reakcija ir slikta, praimera koncentrāciju var regulēt diapazonā no 0,2 līdz 1 μM.Zondes koncentrācija parasti tiek optimizēta diapazonā no 0,1 līdz 0,3 μM.Koncentrācijas gradienta eksperimentus var veikt, lai atrastu labāko grunts un zondes kombināciju.

Termiskā riteņbraukšanas protokols

Piezīmes

1.Ātrās DNS polimerāzes amplifikācijas ātrums nedrīkst būt mazāks par 1 kb/10 s.Temperatūras paaugstināšanās un krituma ātrums, temperatūras kontroles režīms un siltuma vadīšanas efektivitāte dažādiem PCR instrumentiem ļoti atšķiras, tāpēc ir ieteicams optimizēt optimālos reakcijas apstākļus konkrētajam ātrās PCR instrumentam.

2.Sistēma ir ļoti pielāgojama, ar augstāku specifiku un jutīgumu.

3.Piemērots lietošanai kā augstas jutības PCR noteikšanas reaģenti, un to var izmantot multipleksās PCR amplifikācijas reakcijās.

4.5′→3′ polimerāzes aktivitāte, 5′→3′ eksonukleāzes aktivitāte;nav 3′→5′ eksonukleāzes aktivitātes;nav korektūras funkcijas.

5.Piemērots PCR un RT-PCR kvalitatīvai un kvantitatīvai pārbaudei.

6.PCR produkta 3′ gals ir A, ko var tieši klonēt T vektorā.

7.Trīspakāpju metode ir ieteicama primeriem ar zemu atkvēlināšanas temperatūru vai fragmentu pastiprināšanai, kas garāki par 200 bp.