Viena soļa ātrais RT-qPCR zondes premikss-UNG
Kaķa Nr.: HCR5143A
One Step RT-qPCR zondes komplekts (FOR FAST) ir uz zondi balstīts RT-qPCR ātrās noteikšanas komplekts, kas piemērots viena plexa vai multipleksa kvantitatīvā PCR, izmantojot RNS kā veidni (piemēram, RNS vīrusu).Šajā produktā tiek izmantota jaunās paaudzes ar antivielām modificēta Taq DNS polimerāze un viena posma specializētā reversā transkriptāze ar optimizētu buferi ātrai pastiprināšanai, kam ir ātrāks pastiprināšanas ātrums, augstāka pastiprināšanas efektivitāte un specifiskums.Tas atbalsta līdzsvarotu pastiprināšanu gan viena plexa, gan multipleksos zemas un augstas koncentrācijas paraugos īsā laikā.
Sastāvdaļas
1. 5 ×RT-qPCR buferis (U+)
2. Enzīmu maisījums (U+)
Piezīmes:
a.5×RT-qPCR buferis (U+) ietver dNTP un Mg2+;
b.Enzīmu maisījums (U+) ietver reverso transkriptāzi, Hot Start Taq DNS polimerāzi, RNāzes inhibitoru un UDG;
c.Izmantojiet RNase-Free uzgaļus, EP caurules utt.
Pirms lietošanas rūpīgi samaisiet 5×RT-qPCR buferšķīdumu (U+).Ja pēc atkausēšanas ir nokrišņi, pagaidiet, līdz buferšķīdums atgriežas istabas temperatūrā, samaisiet un izšķīdiniet un pēc tam izmantojiet tos kā parasti.
Uzglabāšanas apstākļi
Produkts tiek piegādāts kopā ar sauso ledu, un to var uzglabāt -25 ~ -15 ℃ 1 gadu.
Instrukcijas
1. Reakcija Sistēma
| Sastāvdaļas | Tilpums (20 μL reakcija) |
| 2 × RT-qPCR buferis | 4μL |
| Enzīmu maisījums (U+) | 0,8 μl |
| Primer Forward | 0,1–1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1–1,0 μM |
| TaqMan zonde | 0,05–0,25 μM |
| Veidne | X μL |
| RNāzes nesaturošs ūdens | līdz 25 μL |
Piezīmes: reakcijas tilpums ir 10-50μL.
2. Riteņbraukšanas protokols (Sstandarta)
| Cikls solis | Temp. | Laiks | Cikli |
| Reversā transkripcija | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Sākotnējā denaturācija | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturācija | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Atkvēlināšana/pagarināšana | 60 ℃ | 30 sek |
| Riteņbraukšanas protokols (Ātri) Cikls solis |
Temp. |
Laiks |
Cikli |
| Reversā transkripcija | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Sākotnējā denaturācija | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturācija | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Atkvēlināšana/pagarināšana | 60 ℃ | 10 s |
Piezīmes:
a.Reversās transkripcijas temperatūra ir no 50 ℃ līdz 60 ℃, temperatūras paaugstināšana palīdz pastiprināt sarežģītas struktūras un augsta CG satura veidnes;
b.Optimālā atkausēšanas temperatūra ir jāpielāgo, pamatojoties uz primera Tm vērtību, un jāizvēlas īsākais laiks fluorescences signālu savākšanai, pamatojoties uz reāllaika PCR instrumentu.
Piezīmes
Lūdzu, valkājiet nepieciešamos IAL, piemēram, laboratorijas mēteli un cimdus, lai nodrošinātu savu veselību un drošību!
