Bst 2.0 DNS polimerāze (bez glicerīna)
Bst DNS polimerāze V2 ir iegūta no Bacillus stearothermophilus DNS polimerāzes I, kurai ir 5′→3′ DNS polimerāzes aktivitāte un spēcīga ķēdes aizstāšanas aktivitāte, bet nav 5′→3′ eksonukleāzes aktivitātes.Bst DNS polimerāze V2 ir ideāli piemērota virkņu pārvietošanai, izotermiskai amplifikācijai LAMP (cilpas mediēta izotermiska amplifikācija) un ātrai sekvencēšanai.
Sastāvdaļas
| Komponents | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (bez glicerīna) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Lietojumprogrammas
1.LAMP izotermiskā pastiprināšana
2.DNS virknes vienas pārvietošanas reakcija
3.High GC gēnu sekvencēšana
4.DNS nanogramu līmeņa sekvencēšana.
Uzglabāšanas stāvoklis
Transportēšana zem 0°C un jāuzglabā -25°C~-15°C.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā fermenta daudzums, kas 30 minūtēs 65 °C temperatūrā iekļauj 25 nmol dNTP skābē nešķīstošā materiālā.
Kvalitātes kontrole
1.Olbaltumvielu tīrības tests (SDS-PAGE):Bst DNS polimerāzes V2 tīrība ir ≥99% noteikta ar SDS-PAGE analīzi, izmantojot Coomassie Blue noteikšanu.
2.Eksonukleāzes aktivitāte:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1 μg λ-Hind Ⅲ sagremotas DNS 16 stundas 37 ℃ temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
3.Nikase darbība:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1 μg pBR322 DNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
4.RNāzes aktivitāte:Inkubējot 50 μL reakciju, kas satur vismaz 8 U Bst DNS polimerāzes V2 ar 1,6 μg MS2 RNS 16 stundas 37 °C temperatūrā, nenotiek nosakāma degradācija, kā noteikts.
5.E. coli DNS:120 U Bst DNS polimerāzes V2 pārbauda uz E. coli genoma DNS klātbūtni, izmantojot TaqMan qPCR ar E. coli 16S rRNS lokusam specifiskiem praimeriem.E. coli genoma DNS piesārņojums ir ≤1 kopija.
LAMPAS reakcija
| Sastāvdaļas | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (katrs 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μL |
| Grunts maisījumsb | 6 μL |
| Bst DNS polimerāze V2 (bez glicerīna) (8 U/ul) | 1 μL |
| Veidne | × μL |
| ddH₂O | Līdz 25 μL |
Piezīmes:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): atbilstoši eksperimentālām vajadzībām kā aizstājējus var izmantot citas krāsvielas;
2) b.Gruntēšanas maisījums: iegūts, sajaucot 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB un citus tilpumus.
Reakcija un stāvoklis
1 × HC Bst V2 buferšķīdums, inkubācijas temperatūra ir no 60°C līdz 65°C.
Siltuma inaktivācija
80 °C, 20 minūtes
