BspQI
BspQI var rekombinanti ekspresēt E. coli, kas var atpazīt noteiktas vietas un tiek ražots zem
BspQI, IIs restrikcijas endonukleāzes restrikcijas endonukleāze, ir atvasināts no rekombinantā E. coli celma, kas pārnēsā klonētu un modificētu BspQI gēnu no Bacillus sphaericus.Tas var atpazīt noteiktas vietas, un atpazīšanas secība un šķelšanās vietas ir šādas:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produkta īpašības
1. Augsta aktivitāte, Ātra gremošana;
2. Zema zvaigžņu aktivitāte, nodrošinot precīzu griešanu kā “skalpelis”;
3. Bez BSA un bez dzīvnieku izcelsmes;
Metilēšanas jutība
Desmu metilēšana:Nav jutīgs;
Dcm metilēšana:Nav jutīgs;
CpG metilēšana:Nav jutīgs;
Uzglabāšanas apstākļi
Produkts jānosūta ≤ 0 ℃;Uzglabāt temperatūrā -25 ~ - 15 ℃.
Uzglabāšanas buferis
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitola, 500 µg/ml rekombinantā albumīna, 0,1% Trition X-100 un 50% glicerīna (pH 7,0 25 °C temperatūrā).
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā enzīma daudzums, kas nepieciešams, lai sagremotu 1 µg iekšējās kontroles DNS 1 stundā 50 °C temperatūrā 50 µL kopējā reakcijas tilpumā.
Kvalitātes kontrole
Olbaltumvielu tīrības tests (SDS-PAGE):BspQI tīrība tika noteikta ar SDS-PAGE analīzi ≥95%.
RNāze:10 U BspQI ar 1,6 μg MS2 RNS 4 stundas 50 ℃ temperatūrā nenoārda, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
Nespecifiska DNS aktivitāte:10 U BspQI ar 1 μg λ DNS 50 ℃ temperatūrā 16 stundas, salīdzinot ar 50 ℃ 1 stundu, nerada DNS pārpalikumu, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
Ligēšana un pārgriešana:Pēc 1 μg λDNS sagremošanas ar 10 U BspQI DNS fragmentus var ligēt ar T4 DNS ligāzi 16ºC temperatūrā.Un šos ligētos fragmentus var pārgriezt ar BspQI.
E. coli DNS: E. coli 16s rDNS specifiskā TaqMan qPCR noteikšana parādīja, ka E.coli genoma atlikums ≤ 0,1 pg/ul.
Saimnieka proteīna atlikums:≤ 50 ppm
Baktēriju Endotoksīns: LAL tests, saskaņā ar Ķīnas Farmakopejas IV 2020. gada izdevumu, gēla limita testa metode, vispārīgs noteikums (1143).Baktēriju endotoksīnu saturam jābūt ≤10 EU/mg.
Reakcijas sistēma un apstākļi
| Komponents | Skaļums |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNS | 1 μg |
| 10 x BspQ I buferis | 5 μL |
| dd H2O | Līdz 50 μL |
Reakcijas apstākļi: 50℃, 1-16 h.
Siltuma inaktivācija: 80°C 20 min.
Ieteicamā reakcijas sistēma un apstākļi var nodrošināt salīdzinoši labu enzīmu sagremošanas efektu, kas ir paredzēts tikai atsaucei. Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet eksperimentālos rezultātus.
Produkta pielietojums
Restrikcijas endonukleāzes gremošana, ātra klonēšana.
Piezīmes
1. Enzīma tilpums ≤ 1/10 no reakcijas tilpuma.
2. Zvaigžņu aktivitāte var rasties, ja glicerīna koncentrācija ir lielāka par 5%.
3. Šķelšanās aktivitāte var rasties, ja substrāta attiecība ir zemāka par ieteikto.
