Ultra Nuclease
UltraNuclease ir ģenētiski modificēta endonukleāze, kas iegūta no Serratia marcescens, kas spēj noārdīt DNS vai RNS, gan divpavedienu, gan vienpavedienu, lineāru vai apļveida plašā apstākļu diapazonā, pilnībā noārdīt nukleīnskābes 5'-monofosfāta oligonukleotīdos ar garumu 3-5 bāzes. .Pēc gēnu inženierijas modifikācijas produkts tika fermentēts, ekspresēts un attīrīts Escherichia coli (E. coli), kas samazina šūnu supernatanta un šūnu lizāta viskozitāti, kā arī uzlabo proteīna attīrīšanas efektivitāti un funkcionālo izpēti.To var izmantot arī gēnu terapijā, vīrusu attīrīšanā, vakcīnu ražošanā, proteīnu un polisaharīdu farmācijas rūpniecībā kā saimniekorganisma atlieku nukleīnskābju noņemšanas reaģentu.
Produkta īpašības
| CAS Nr. | 9025-65-4 |
| EK Nr. | |
| Molekulārais svars | 30 kDa |
| Izoelektriskais punkts | 6.85 |
| Olbaltumvielu tīrība | ≥99% (SDS-PAGE un SEC-HPLC) |
| Īpaša darbība | ≥1.1 × 106 V/mg |
| Optimāla temperatūra | 37°C |
| Optimālais pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | negatīvs |
| Bioslodze | ＜10 KVV/100 000 U |
| Atlikušais saimniekšūnu proteīns | ≤10 ppm |
| Smagais metāls | ≤10 ppm |
| Baktēriju endotoksīns | ＜0.25EU/1000U |
| Uzglabāšanas buferis | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerīns |
Uzglabāšanas apstākļi
≤0°C transportēšana；-25~-15°C Uzglabāšana, 2 gadu derīguma termiņš (izvairieties no sasalšanas-atkausēšanas).
Vienības definīcija
Fermenta daudzums, kas izmantots, lai mainītu △A260 absorbcijas vērtību par 1,0 30 minūšu laikā 37 °C temperatūrā, pH 8,0, kas ir ekvivalents sagremotam 37 μg laša spermas DNS, sagriežot oligonukleotīdos, tika definēts kā aktīvā vienība (U).
Kvalitātes kontrole
Atlikušais saimniekšūnu proteīns: ELISA komplekts
•Proteāze Atlikumi: 250KU/mL UltraNuclease reaģēja ar substrātu 60 minūtes, aktivitāte netika konstatēta.
•Baktēriju endotoksīns: LAL-Test, Farmakopeja Ķīnas Tautas Republikas 4. sējums (2020. gada izdevums) gēla limita testa metode.Vispārīgie noteikumi (1143).
•Bioslodze: Ķīnas Tautas Republikas farmakopeja, 4. sējums (2020. gada izdevums) — Vispārīgi
Sterilitātes pārbaudes noteikumi (1101), ĶTR nacionālais standarts, GB 4789.2-2016.
•Smagais metāls:ICP-AES, HJ776-2015.
Darbība
UltraNuclease aktivitāte tika ievērojami kavēta, ja SDS koncentrācija pārsniedza 0, 1% vai EDTA
koncentrācija bija lielāka par 1 mM. Virsmaktīvā viela Triton X-100, Tween 20 un Tween 80 neietekmēja nukleāzi
īpašības, ja koncentrācija bija zem 1,5%.
| Darbība | Optimāla darbība | Derīga darbība |
| Temperatūra | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-merkaptoetanols | 0-100mM | >100mM |
| Vienvērtīgais metāla jons (Na+, K+ utt.) | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
Lietošana un devas
• Izņemiet eksogēnu nukleīnskābi no vakcīnas produktiem, samaziniet atlikušās nukleīnskābju toksicitātes risku un uzlabojiet produktu drošību.
• Samazināt barības šķidruma viskozitāti, ko izraisa nukleīnskābe, saīsināt apstrādes laiku un palielināt proteīna ražu.
• Noņemiet nukleīnskābi, kas iesaiņoja daļiņu (vīrusu, ieslēguma ķermeni utt.), kas ir labvēlīga
daļiņu atbrīvošanai un attīrīšanai.
| Eksperimentālais veids | Olbaltumvielu ražošana | Vīruss, Vakcīna | Šūnu zāles |
| Šūnu skaits | 1g šūnas mitrā svara (atkārtoti suspendēts ar 10 ml buferšķīduma) | 1L fermentācija šķidrs supernatants | 1L kultūra |
| Minimālā deva | 250 U | 100 U | 100 U |
| Ieteicamā deva | 2500 U | 25 000 U | 5000 U |
• Apstrāde ar nukleāzi var uzlabot kolonnas hromatogrāfijas, elektroforēzes un blotēšanas analīzes parauga izšķirtspēju un atgūšanu.
• Gēnu terapijā nukleīnskābi atdala, lai iegūtu attīrītus ar adeno saistītus vīrusus.
