Temperatūras jutīgs UNG

Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) ir iegūts ar rekombinanto ekspresiju E. coli.Enzīms katalizē brīvā uracila izdalīšanos no uracilu saturošas vienas un divpavedienu DNS un ir neaktīvs pret RNS.Salīdzinot ar parasto E. coli gēna izcelsmes UNG enzīmu, TS-UNG enzīmam ir augstāka aktivitāte zemās temperatūrās (20℃~37℃), un tas ir jutīgs pret temperatūru un viegli inaktivējams (50℃), izvairoties no dUTP saturošas amplifikācijas degradācijas. produkti istabas temperatūrā pēc atlikušās aktivitātes, kas var palikt pēc parastā UNG enzīma inaktivācijas.Tāpēc TS-UNG enzīms ir ne tikai piemērots PCR piesārņojuma novēršanas reakcijai, bet arī labi sakrīt ar RT-PCR amplifikācijas programmu un var tikt izmantots RT-PCR piesārņojuma novēršanas reakcijā.

Ieteicamais pielietojums

Piesārņojuma novēršanas pastiprināšana

Uzglabāšanas stāvoklis

-20°C ilgstošai uzglabāšanai, pirms lietošanas labi jāsamaisa, izvairieties no biežas sasaldēšanas-atkausēšanas.

Uzglabāšanas buferis

20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizators, 50% glicerīns.

Vienības definīcija

Enzīma daudzums, kas nepieciešams, lai noārdītu 1 µg vienpavedienu DNS, kas satur dU bāzes, 1 stundas laikā 37°C temperatūrā ir 1 aktivitātes vienība (U).

Kvalitātes kontrole

1.SDS-PAGE elektroforētiskā tīrība ir lielāka par 98%

2.Degradācijas aktivitāte, partiju kontrole, stabilitāte

3.Nav eksogēnas nukleāzes aktivitātes, nav eksogēnas endonukleāzes vai eksonukleāzes piesārņojuma.

Instrukcijas

Piezīme: a: Ja to izmanto qPCR/qRT-PCR, fluorescējošā zonde jāpievieno reakcijas sistēmai.Parasti 0,2 μM galīgā grunts koncentrācija var dot labus rezultātus;ja reakcija ir slikta, praimera koncentrāciju var regulēt diapazonā no 0,2 līdz 1 μM.Parasti zondes koncentrācija tiek optimizēta diapazonā no 0,1 līdz 0,3 μM.Koncentrācijas gradienta eksperimentus var veikt, lai atrastu labāko grunts un zondes kombināciju.

Piezīmes

1.TS-UNG enzīma optimālā reakcijas temperatūra ir salīdzinoši zema, un to var optimizēt diapazonā no 20 ℃ ~ 37 ℃, fermenta devu un reakcijas laiku var optimizēt diapazonā no 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;un fermentu var inaktivēt reversās transkripcijas procesā.

2.Tas ir piemērots PCR un RT-PCR, lai novērstu piesārņojumu.

3.Izvairieties no biežas sasaldēšanas-atkausēšanas un nepakļaujiet lielām temperatūras svārstībām.

4.Dažādiem pastiprināmajiem gēniem ir atšķirīga dUTP izmantošanas efektivitāte un jutība pret UNG enzīmu, tādēļ, ja UNG sistēmas izmantošana noved pie detektēšanas jutības samazināšanās, reakcijas sistēma ir jāpielāgo un jāoptimizē, ja nepieciešams tehniskais atbalsts, lūdzu, sazinieties ar mūsu kompānija.