Sārmainās fosfatāzes (ALP)
Apraksts
Sārmainā fosfatāze ir iegūta no rekombinantā E. coli celma, kas nes TAB5 gēnu.Enzīms katalizē DNS un RNS fosfomonoesteru 5' un 3' galu defosforilāciju.Tas arī hidrolizē ribozi, kā arī dezoksiribonukleozīdu trifosfātus (NTP un dNTP).TAB5 Alkaline Fosphatase iedarbojas uz 5' izvirzītiem, 5' padziļinātiem un neasiem galiem.Fosfatāzi var izmantot daudzos molekulārās bioloģijas lietojumos, piemēram, klonēšanai vai zondes gala marķēšanai, lai noņemtu DNS vai RNS fosforilētos galus.Klonēšanas eksperimentos defosforilēšana neļauj linearizētajai plazmīdas DNS pašligācijai.Tas var arī noārdīt neinkorporētos dNTP PCR reakcijās, lai sagatavotu veidni DNS sekvencēšanai.Enzīms tiek pilnībā un neatgriezeniski inaktivēts, karsējot 70°C 5 minūtes, tādējādi fosfatāzes noņemšana pirms ligēšanas vai beigu marķēšanas nav nepieciešama.
Lietošana
1.Sārmainās fosfatāzes, kas savienotas ar olbaltumvielām (antivielām, streptavidīnu utt.), var īpaši identificēt mērķa molekulas, un to var izmantot ELISA, WB un histoķīmiskajā noteikšanā;
2.Sārmaino fosfatāzi var izmantot, lai defosforizētu DNS vai RNS 5'-galu, lai novērstu pašsavienošanos;
3. Iepriekš minēto defosforilēto DNS vai RNS var marķēt ar radioaktīvi iezīmētiem fosfātiem (izmantojot T4 polinukleotīdu kināzi).
Ķīmiskā struktūra
Specifikācija
Pārbaudes preces | Specifikācijas |
Enzīmu aktivitāte | 5U/μL |
Endonukleāzes aktivitāte | Nav atklāts |
Eksonukleāzes aktivitāte | Nav atklāts |
Niknēšanas aktivitāte | Nav atklāts |
RNāzes aktivitāte | Nav atklāts |
E.coli DNS | ≤1 kopija/5 U |
Endotoksīns | LAL-tests, ≤10EU/mg |
Tīrība | ≥95% |
Transportēšana un uzglabāšana
Transports:AmbIent
Uzglabāšana:Uzglabāt 2-8°C temperatūrā
Ieteicams veikt atkārtotu pārbaudiDzīve:2 gadi