DNSāze I
DNāze I (dezoksiribonukleāze I) ir endodezoksiribonukleāze, kas var sagremot vienas vai divpavedienu DNS.Tas atpazīst un sašķeļ fosfodiestera saites, lai iegūtu monodeoksinukleotīdus vai vienas vai divpavedienu oligodeoksinukleotīdus ar fosfātu grupām 5'-galā un hidroksilgrupu 3'-galā.DNāzes I aktivitāte ir atkarīga no Ca2+, un to var aktivizēt divvērtīgie metālu joni, piemēram, Mn2+ un Zn2+.5mM Ca2+ aizsargā fermentu no hidrolīzes.Mg2+ klātbūtnē ferments varēja nejauši atpazīt un nošķelt jebkuru vietu jebkurā DNS virknē.Mn2+ klātbūtnē DNS dubultās virknes var vienlaicīgi atpazīt un sašķelt gandrīz vienā un tajā pašā vietā, veidojot plakanu galu DNS fragmentus vai lipīgu galu DNS fragmentus ar 1-2 nukleotīdiem, kas izvirzīti uz āru.
Produkta īpašums
Liellopu aizkuņģa dziedzera DNāze I tika ekspresēta rauga ekspresijas sistēmā un attīrīta.
Coponenti
| Komponents | Skaļums | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNāze I, bez RNāzes | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNāzes I buferis | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transportēšana un uzglabāšana
1. Uzglabāšanas stabilitāte: – 15℃~-25℃ uzglabāšanai;
2. Transporta stabilitāte: transportēšana zem ledus pakām;
3. Piegādāts: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerīns, pH 7,6 pie 25 ℃.
Vienības definīcija
Viena vienība ir definēta kā enzīma daudzums, kas 37 °C temperatūrā pilnībā noārdīs 1 µg pBR322 DNS 10 minūtēs.
Kvalitātes kontrole
RNāze:5 U DNāzes I ar 1,6 μg MS2 RNS 4 stundas 37 ℃ temperatūrā nenoārda, kā noteikts ar agarozes gēla elektroforēzi.
Baktēriju Endotoksīns:LAL tests, saskaņā ar Ķīnas Farmakopejas IV 2020. gada izdevumu, gēla limita testa metode, vispārīgs noteikums (1143).Baktēriju endotoksīnu saturam jābūt ≤10 EU/mg.
Lietošanas instrukcija
1. Sagatavojiet reakcijas šķīdumu RNāzes nesaturošā mēģenē atbilstoši tālāk norādītajām proporcijām:
| Komponents | Skaļums |
| RNS | X μg |
| 10 × DNāzes I buferis | 1 μL |
| DNāze I, bez RNāzes (5U/μL) | 1 U uz μg RNS |
| ddH2O | Līdz 10 μL |
2,37 ℃ 15 minūtes;
3. Pievienojiet beigu buferi, lai apturētu reakciju, un karsējiet 65 ℃ 10 minūtes, lai inaktivētu DNāzi I. Paraugu var tieši izmantot nākamajam transkripcijas eksperimentam.
Piezīmes
1.Izmantojiet 1U DNāzi I uz μg RNS vai 1U DNāzi I mazāk nekā 1 μg RNS.
2. EDTA jāpievieno līdz 5 mM galīgajai koncentrācijai, lai aizsargātu RNS no sadalīšanās fermentu inaktivācijas laikā.
