CHO HCP ELISA komplekts
Šajā testā tiek izmantota vienpakāpes imūnsorbcijas ELISA metode.Paraugi, kas satur CHOK1 HCP, vienlaikus reaģē ar HRP iezīmētu kazas anti-CHOK1 antivielu un anti-CHOK1 antivielu, kas pārklāta uz ELISA plāksnes, beidzot veidojot sviestmaižu kompleksu no cietās fāzes antivielas-HCP iezīmētas antivielas.Nesaistīto antigēnu-antivielu var noņemt, mazgājot ELISA plāksni.TMB substrātu pievieno iedobei, lai nodrošinātu pietiekamu reakciju.Krāsas veidošanās tiek apturēta pēc apturēšanas šķīduma pievienošanas, un reakcijas šķīduma OD jeb absorbcijas vērtību pie 450/650 nm nolasa ar mikroplašu lasītāju.OD vērtība vai absorbcijas vērtība ir proporcionāla HCP saturam šķīdumā.No tā HCP koncentrāciju šķīdumā var aprēķināt pēc standarta līknes.
Pieteikums
Šo komplektu izmanto, lai kvantitatīvi noteiktu CHOK1 saimniekšūnu proteīna atlieku saturu paraugos.
Coponenti
| S/N | Komponents | Koncentrēšanās | Uzglabāšanas apstākļi |
| 1 | CHOK1 HCP standarts | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤-20 ℃, sargāt no gaismas |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, sargāt no gaismas |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Pārtraukt risinājumu | NA | RT |
| 6 | Mikroplākšņu blīvētāji | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Augstas adsorbcijas priekšpārklājuma plāksnes | NA | 2-8℃ |
Nepieciešamais aprīkojums
| Izejmateriāli / aprīkojums | Ražot | Katalogs |
| Mikroplašu lasītājs | Molekulārās ierīces | Spectra Max M5, M5e vai līdzvērtīgs |
| Termokakseris | Ependorfs | Eppendorf/5355 vai līdzvērtīgs |
| Vortex maisītājs | IKA | MS3 Digital vai līdzvērtīgs |
Uzglabāšana un stabilitāte
1.Transportēšana -25~-15°C.
2.Uzglabāšanas apstākļi ir tādi, kā parādīts 1. tabulā;komponenti 1-2 tiek uzglabāti ≤-20°C, 5-6 tiek uzglabāti RT,3、4、7、8 tiek uzglabāti 2-8 ℃ temperatūrā;derīguma termiņš ir 12 mēneši.
Produkta parametri
1.Jutība: 1ng/mL
2.Noteikšanas diapazons: 3-100 ng/ml
3.Precizitāte: Intra-testa CV≤ 10%, starppārbaudes CV≤ 15%
4.HCP pārklājums: >80%
5.Specifiskums: Šis komplekts ir universāls, jo tas īpaši reaģē ar CHOK1 HCP neatkarīgi no attīrīšanas procesa.
Reaģenta sagatavošana
1.PBST 0,05%
Ņem 15 ml 20×PBST 0,05%, kas atšķaidīts ar ddH2O, un uzpilda līdz 300 ml.
2.1,0% BSA
Paņemiet no pudeles 1 g BSA un atšķaidiet 100 ml PBST 0,05%, labi samaisiet, līdz pilnībā izšķīst, un uzglabājiet 2–8°C.Sagatavotais atšķaidīšanas buferšķīdums ir derīgs 7 dienas.Ieteicams sagatavot pēc vajadzības.
3.Noteikšanas šķīdums 2μg/mL
Paņemiet 48 μL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP un atšķaidiet ar 11 952 μL 1% BSA, lai iegūtu galīgo koncentrāciju 2 μg/mL noteikšanas šķīduma.
4.QC un CHOK1 HCP standartu sagatavošana
| Caurule Nē. | Oriģināls | Koncentrēšanās | Skaļums | 1% BSA | kopējais apjoms | Fināls |
| A | Standarta | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabula: QC un standartu sagatavošana
Pārbaudes procedūra
1.Sagatavojiet reaģentus, kā norādīts iepriekš sadaļā “Reaģenta sagatavošana”.
2.Katrā iedobē ņem 50 μL standartu, paraugu un kvalitātes kontroles (skatīt 3. tabulu), pēc tam pievienojiet 100 μL noteikšanas šķīduma (2 μg/mL);Pārklājiet plāksni ar blīvētāju un novietojiet ELISA plāksni uz termomiksiera.Inkubējiet ar ātrumu 500 apgr./min, 25±3 ℃ 2 stundas.
3.Apgrieziet mikroplāksni izlietnē un izmetiet pārklājuma šķīdumu.Katrā iedobē iepiliniet 300 μL PBST 0,05%, lai nomazgātu ELISA plāksni un izmestu šķīdumu, un atkārtojiet mazgāšanu 3 reizes.Apgrieziet šķīvi otrādi uz tīra papīra dvieļa un nosusiniet.
4.Katrai iedobei pievienojiet 100 μL TMB substrāta (skatiet 1. tabulu), aizveriet ELISA plāksni un inkubējiet tumsā 25 ± 3 ℃ 15 minūtes.
5.Katrā iedobē ar pipeti ievadiet 100 μL apturēšanas šķīduma.
6.Izmēriet absorbciju pie viļņa garuma 450/650 nm ar mikroplašu lasītāju.
7.Analizējiet datus, izmantojot SoftMax vai līdzvērtīgu programmatūru.Uzzīmējiet standarta līkni, izmantojot četru parametru loģistikas regresijas modeli.
Standarta līknes piemērs
PIEZĪME. Ja HCP koncentrācija paraugā pārsniedz standarta līknes augšējo robežu, pirms testēšanas tas ir pareizi jāatšķaida ar atšķaidīšanas buferšķīdumu.
PIEZĪMES
Apturēšanas šķīdums ir 2M sērskābe, lūdzu, rīkojieties uzmanīgi, lai izvairītos no izšļakstīšanās!
